【食道肿瘤组织源性原代细胞总DNA】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【食道肿瘤组织源性原代细胞总DNA】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【食道肿瘤组织源性原代细胞总DNA】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

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【食道肿瘤组织源性原代细胞总DNA】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

1027281  AllStars Neg. Control siRNA (20 nmol)        CNY                                  

1026883  MagAttract Suspension G (1,6/2),KG          CNY                                  

1026577  DyeEx 2.0 Spin Kit (10)        CNY                                  

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9019598  Lead, vac trap sensor, CX1          CNY                                  

9019573  Belt, X-axis assembly, CQx          CNY                                  

9019546  Clamp, cable, 3 wires 2 tabs, Cxx        CNY                                  

9019533  PCB, USB, QGY           CNY                            【食道肿瘤组织源性原代细胞总DNA】  

9019518  RISER VACUUM 16.25MM          CNY                                  

217004    miRNeasy Mini Kit (50)        CNY                                  

204243    QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit (200)  For 200 x 50 ul reactions: 3 x 1.7 ml QuantiTect SYBR Green RT-PCR Master Mix,* 100 ul QuantiTect RT Mix, 2 x 2.0 ml RNase-free water  CNY                                  

QY-HC018      人肺成纤维细胞 HFL1 HFL1                                 

QY-HC020      人肝星形细胞 LX-2     LX-2                                  

QY-HC021      张氏肝细胞 Chang Liver      ChangLiver                                

QY-HC022      表达HBV病毒的人肝细胞 HepG2.2.15     HepG2.2.15                               

QY-HC023      人非小细胞肺癌细胞 HCC827    HCC827                             

QY-HC024      人大细胞肺癌细胞 NCI-H460     NCI-H460                                 

QY-HC025      人结肠腺癌细胞 SW480     SW480                               

QY-HC026      人肝癌细胞 BEL-7404  BEL-7404                                  

QY-HC027      人胃癌细胞 NCI-N87   NCI-N87                             【食道肿瘤组织源性原代细胞总DNA】

QY-HC028      人鼻咽低分化鳞癌细胞株 SUNE-1    SUNE-1                             

QY-HC029      人胚肾细胞 293[HEK-293；HEK293]　    293[HEK-293；HEK293]　                              

QY-HC030      人SV40转染成骨细胞 hFOB 1.19     hFOB1.19                                  

QY-HC031      人乳腺导管癌细胞 BT474   BT474                                

QY-HC032      人肺黏液上皮样癌细胞NCI-h1688改为NCI-H292　      NCI-h1688改为NCI-H292　                                 

QY-HC033      人表皮癌细胞  A431    A431                                  

QY-HC034      人乳腺癌细胞 MDA-MB-175      MDA-MB-175                            

QY-HC035      人宫颈癌细胞 HeLa     HeLa                                  

QY-HC036      人胃腺癌细胞 SGC-7901    SGC-7901                                 

QY-HC037      人食管癌细胞 EC9706 EC9706                              

QY-HC038      人食管癌细胞 ECA109 ECA109                             

QY-HC039      人卵巢癌细胞 SKOV3  SKOV3                              

QY-HC041      人肺癌细胞株 A549     A549                                  

QY-HC042      人骨肉瘤细胞 MG-63  MG-63                               

QY-HC043      人骨髓瘤细胞 U266U266B1 U266U266B1                             

QY-HC044      人骨髓瘤细胞 3T3D    3T3D                                  【食道肿瘤组织源性原代细胞总DNA】

QY-HC045      人乳腺癌细胞 MCF-7  MCF-7                               

QY-HC046      人组织细胞淋巴瘤细胞 U-937    U-937                                

QY-HC047      人纤维肉瘤细胞 HT1080    HT1080                              

QY-HC048      人胚肾细胞 AD293      AD293                               

QY-HC049      人涎腺腺样囊性癌细胞 ACC3    ACC3                                 

QY-HC050      人结直肠腺癌上皮细胞 DLD-1  DLD-1