【肝肿瘤组织源性原代细胞总DNA】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【肝肿瘤组织源性原代细胞总DNA】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【肝肿瘤组织源性原代细胞总DNA】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【肝肿瘤组织源性原代细胞总DNA】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9019565  Clamp, cable 2 wires 2 tabs, Cxx         CNY                                  

9019543  Bow spring, table rail, Cxx           CNY                                  

9019510  CHAMBER MAIN VAC STATION 1820              CNY                                  

9019505  PLATE SEPARATOR 48 WELL HIGH         CNY                                  

204256    QuantiFast Probe PCR Kit (2000)         CNY                                  

204174    Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kit (400) The Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kit is dedicated for use with the Rotor-Gene Q cycler, providing ultrafast, highly specific quantification in real-time one-step RT-PCR using SYBR Green I.  CNY                                  

204154    QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit (400)         CNY                                  

9019424  Wiring, lower heater, RG3            CNY                                  

9019417  Fan, lid, RG3         CNY                                  

9019393  Solenoid, cooling with flap, RG3          CNY                                  

9019386  Photo Multiplier Tube with cable, RG3        CNY                                  

9019368  Damper, lid, RG6          CNY                            【肝肿瘤组织源性原代细胞总DNA】     

9019347  Motor, 12VDC Heater fan, RG6           CNY                                  

9234697  Manual Hardware Plato 7             CNY                                  

9020477  Gasket, front plate, GSC              CNY                                  

9234463  Coupling, CPC, inline, female, 8mm            CNY                                  

1027285  AllStars Neg. siRNA AF 546 (5 nmol)          CNY                                  

1022564  Mm/Hs_MAPK1 control siRNA (5 nmol)            CNY                                  

9019205  Opto - Stacker, PyroQ96MD        CNY                                  

9019204  Opto - Robot Z motor , PyroQ96MD           CNY                                  

9019200  Hinge kit - Top cover, PyroQ96MD             CNY                                  

1022073  Luciferase GL3 siRNA (5 nm)             CNY                                  

1022064  GFP-22 siRNA (5 nm)          CNY                                  

1018996  PCR Buffer, 10 x (22ml/30),KG           CNY                                  

1064605  MagAttract M48 DNA Manual Kit  (200)           CNY                                  

1066851  PG FMDV RT-PCR Assay (48) LE Z           CNY                                  

1061054  HBV PCR REAGENT I         CNY                                  

1061069  UU PCR REAGENT II          CNY                            【肝肿瘤组织源性原代细胞总DNA】     

1061079  NG PCR REAGENT II         CNY                                  

9019886  Lid, label 4CH, RG3              CNY                                  

9019875  Cover, main, silver, RGQ              CNY                                  

9019836  IPC Hard Drive PCA6751,  PyroQ96ID             CNY                                  

9019769  Valve, shutoff, V2, QX          CNY                                  

QY-HC084      表达SV40T抗原人胚肾上皮细胞 293FT  293FT                                

QY-HC085      人肺鳞癌细胞系 NCI-H226 NCI-H226                                 

QY-HC086      人慢性骨髓性白血病细胞系 K562     K562                                  

QY-HC087      人舌癌细胞 Tca-8113   Tca-8113                            

QY-HC089      人胚肾上皮包装细胞 GP2-293   GP2-293                            

QY-HC090      高转移人肝癌细胞 LM3      LM3                                  

QY-HC091      高转移人肝癌细胞 MHCC97-H   MHCC97-H                               

QY-HC092      低转移人肝癌细胞 MHCC97-L   MHCC97-L                                

QY-HC093      人肾小管上皮细胞系HK-2  HK-2                                  

QY-HC094      人子宫内膜腺癌细胞 HEC-1-A   HEC-1-A                            

QY-HC095      人子宫内膜腺癌细胞 HEC-1-B   HEC-1-B                             【肝肿瘤组织源性原代细胞总DNA】

QY-HC096      人Ishikawa子宫内膜癌细胞 ISK       ISK                             

QY-HC097      人子宫内膜腺癌细胞 AN3CA     AN3CA                              

QY-HC098      人神经母细胞瘤细胞 IMR-32     IMR-32                              

QY-HC099      人皮肤成纤维细胞 HSF      HSF                            

QY-HC0100    人Burkitt淋巴瘤细胞 RAJI RAJI                                  

QY-HC0101    人B淋巴细胞急性白血病细胞 BALL-1     BALL-1                              

QY-HC0102    人宫颈癌细胞 Hela-s3  Hela-s3                               

QY-HC0103    人卵巢癌细胞 HO-8910      HO-8910                            

QY-HC0104    人肾小球系膜细胞 HMC     HMC                                  

QY-HC0105    人小细胞肺癌细胞 NCI-H446     NCI-H446                                 

QY-HC0106    人骨髓瘤细胞/人浆细胞白血病细胞 NCI-H929      NCI-H929                                 

QY-HC0108    人胚肺成纤维细胞 HELF    HELF                                 

QY-HC0109    人饲养层上皮细胞 HPT-8   HPT-8                                

QY-HC0110    人非小细胞肺癌细胞人肺支气管癌细胞 NCI-H1650　   NCI-H1650　                            

QY-HC0111     人大细胞肺癌细胞 NCI-H661　 NCI-H661　                              

QY-HC0112    人外周血嗜碱性白血病细胞 KU812   KU812                                【肝肿瘤组织源性原代细胞总DNA】

QY-HC0113    人乳腺导管癌细胞 MDA-MB-435      MDA-MB-435                            

QY-HC0114    人骨髓瘤细胞 OPM-2        OPM-2                               

QY-HC0115    人腺癌细胞 F56   F56                             

QY-HC0116    人SV－40转化肺成纤维细胞 WI-38VA13       WI-38VA13