【直肠肿瘤组织源性原代细胞总DNA】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【直肠肿瘤组织源性原代细胞总DNA】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【直肠肿瘤组织源性原代细胞总DNA】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【直肠肿瘤组织源性原代细胞总DNA】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

1061051  HBV PCR REAGENT II        CNY                                  

9019890  Foam insert, rotor securing, QIAC              CNY                                  

9019861  Rotor Locking Nut Set          CNY                                  

9019821  IQ/OQ document, QS           CNY                                  

9019768  Sensor, interlock2, with cable, QX              CNY                                  

9019765  Belt, Y, V2, QX             CNY                                  

9019727  Board, transport conversion, V2, QX           CNY                                  

9013523  Underlay, vaccum manifold, v2.01              CNY                                  

9013447  Control unit Y/Z, 4 channel           CNY                                  

9013431  Maintenance kit, semi annual, BR9600 (E)           CNY                            【直肠肿瘤组织源性原代细胞总DNA】  

9238807  Round carrier for 12 Tubes 15ml         CNY                                  

9019715  PyroMark Q24 User Manual         CNY                                  

9019648  Mixer module w. top plate, PyroQ96ID        CNY                                  

9019643  Sensor, solenoid, EZ1xl         CNY                                  

9019589  Cable harness, x axis, C34            CNY                                  

9019587  PCB, mainboard, QGY          CNY                                  

9019582  End cap, Y-arm, Cxx             CNY                                  

9019551  Fuse, 2A        CNY                                  

9019513  Adapter, reagent tub plate, CX1            CNY                                  

9019502  TANK UPPER BUFFER ASSY GS        CNY                                  

218073    miScript SYBR Green PCR Kit (200)           CNY                                  

218061    miScript Reverse Transcription Kit (50)              CNY                                  

217504    miRNeasy FFPE Kit (50)              CNY                                  

9019441  Mother board ( micro board V 2.1 )            CNY                                  

204245    QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit (1000)       For 1000 x 50 ul reactions:  25 ml QuantiTect SYBR Green RT-PCR Master Mix (providing a final concentration of 2.5 mM MgCl2), 0.5 ml QuantiTect RT Mix, 20 ml RNase-free water   CNY                                  

204156    QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit (2000)        CNY                            【直肠肿瘤组织源性原代细胞总DNA】  

204074    Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit (400)      The Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit is dedicated for use with the Rotor-Gene Q cycler, providing ultrafast, highly specific quantification in real-time PCR ａnd two-step RT-PCR using SYBR Green I.      CNY                                  

9019432  Hose, cooling blower, RG3           CNY                                  

9019423  Belt, toothed, source optics, RG3         CNY                                  

9019394  Gasket, cooling flap, RG3            CNY                                  

9019385  EPROM, IC main board, state F/W, RG3            CNY                                  

9019367  Gasket, lower chamber, RG6        CNY                                  

1027419  Flexitube siRNA 20 nmol W Modification            CNY                                  

QY-HC0151    人神经母细胞瘤细胞 SK-N-SH  SK-N-SH                            

QY-HC0152    人非小细胞肺癌细胞 NCI-H358 NCI-H358                                 

QY-HC0153    人肺腺癌细胞 NCI-H1975   NCI-H1975                                

QY-HC0154    人巨核细胞白血病细胞 DAMI   DAMI                                

QY-HC0155    人支气管上皮细胞 HBE      HBE                            

QY-HC0156    人胶质母细胞瘤细胞 A172 A172                                  

QY-HC0157    人膀胱移行细胞乳头瘤细胞 RT4      RT4                            

QY-HC0158    人乳腺腺癌细胞 MDA-MB-436  MDA-MB-436                            

QY-AC1446    大鼠心肌细胞 H9C22-1       H9C22-1CRL-1446                            

QY-AC9.1       小鼠肝上皮细胞 NCTC clone 1469 [derivative of NCTC 721   NCTCclone1469[derivativeofNCTC721CCL-9.1                             

QY-AC34 马-达二氏犬肾细胞系 MDCK NBL-2 MDCKNBL-2CCL-34                               

QY-AC2528    猪鼻甲黏膜成纤维细胞 PT-K75 PT-K75CRL-2528                             

QY-AC2389    小鼠胰腺癌细胞 LTPA LTPACRL-2389                                 【直肠肿瘤组织源性原代细胞总DNA】

QY-AC2132    大鼠胰腺癌细胞 DSL-6A/C1     DSL-6A/C1CRL-2132                               

QY-AC2016    小鼠骨髓瘤B淋巴细胞 SP2/MIL-6   SP2/MIL-6CRL-2016                               

QY-AC2005    大鼠脑间质细胞 DI TNC1  DITNC1CRL-2005                            

QY-AC1772    小鼠肌原细胞 C2C12   C2C12CRL-1772                               

QY-AC173      小鼠胚胎成纤维细胞 3T3-L1     3T3-L1CCL-173                               

QY-AC1589    大鼠回肠细胞 IEC-18  IEC-18CRL-1589                              

QY-AC1586    非洲绿猴肾细胞 VERO C1008 [Vero 76, clone E6, Vero E6]   VEROC1008[Vero76,cloneE6,VeroE6]CRL-1586                             

QY-AC1581    小鼠骨髓瘤细胞 Sp2/0-Ag14      Sp2/0-Ag14CRL-1581                              

QY-AC141　 鸭子胚胎成纤维细胞Duck embryo　 Duckembryo　CCL-141                                  

QY-AC12203  鸡胚胎成纤维细胞 UMNSAH/DF-1    UMNSAH/DF-1CRL-12203                              

QY-AC71 小鼠巨噬细胞 RAW 264.7   RAW264.7TIB-71                             

QY-AC10 仓鼠肾成纤维细胞 YXK-21 YXK-21CCL-10                                

QY-AC2007    小鼠表皮细胞 JB6 Cl 30-7b JB6Cl30-7bCRL-2007                               

QY-AC1658    小鼠胚胎细胞 NIH/3T3       NIH/3T3CRL-1658                            

QY-AC2586    小鼠血管内皮瘤细胞 EOMA      EOMACRL-2586                               

QY-AC1503    小鼠胚胎纤维细胞 STO     STOCRL-1503                                   【直肠肿瘤组织源性原代细胞总DNA】

QY-AC001      大鼠肝上皮样干细胞 WB-F344  WB-F344                                  

QY-AC002      小鼠乳腺癌细胞 4T1   4T1