【甲状腺肿瘤组织源性原代细胞总DNA】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【甲状腺肿瘤组织源性原代细胞总DNA】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【甲状腺肿瘤组织源性原代细胞总DNA】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【甲状腺肿瘤组织源性原代细胞总DNA】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9016449  Vacuum Tray, complete, BR8 RD         CNY                                  

9016443  Base Plate, Robovac, BR8 RD4.2 UTP         CNY                                  

9016434  Right Hand End Cap, Wash Head 8-fold              CNY                                  

9016299  PCB, Turntable, X-Main        CNY                            【甲状腺肿瘤组织源性原代细胞总DNA】     

9011900  Holder, tip rack, unit 6-fold           CNY                                  

9011779  Handle, HS shaker adapter plate, BR8000            CNY                                  

9019086  PyroMark Q96 MD Software (5)  "For use with PyroMark Q96 MD instrument.Software for setting up a run ａnd analyzing mutations.

5 licenses"      CNY                                  

9019068  PyroMark CpG SW 1.0 (5)   "Software for PyroMark Q96 ID ａnd PyroMark Q96 MD for analysis ａnd quantification of CpG methylation in epigenetic studies.

Five additional software licenses for PyroMark CpG SW 1.0"    CNY                                  

9019031  User Manual, EZ1xl              CNY                                  

9019021  Damper, door, EZ1xl             CNY                                  

9019004  Grid, UV lamp, EZ1xl           CNY                                  

9019003  Hinge, for door, EZ1xl          CNY                                  

9018951  RBlock, 16x0.2ml PCR 8x2ml/1.5ml Flat/Ta        CNY                                  

9018930  Adapter, 33x2ml flat base Tubes          CNY                                  

9022739  Rotor-Gene AssayManager SOW(10 licenses)            CNY                                  

9022707  Retainer, PMT Baffle, DML3000          CNY                                  

9016027  Extension set (Z), 4 x 50mm, Pos. Sys.              CNY                                  

9015911  Connecting Tool, Disp.Head, BR8 V2.0        CNY                                  

9015864  EZ1 FNSC Card     Pre-programmed card for BioRobot EZ1 Forensic protocols      CNY                                  

9015638  AC fuse, 115 V, 250 8A, M48              CNY                            【甲状腺肿瘤组织源性原代细胞总DNA】     

9015537  Window, for door          CNY                                  

9019170  PCB 2 - Connection, PyroQ96MD        CNY                                  

9019157  Cog belt kit - X/Y, PyroQ96MD           CNY                                  

9014145  Rubber spring (10), Microplate Holder LH           CNY                                  

9021254  PC, DCU        CNY                                  

9021135  Power Supply Module 1 (U164), DCU         CNY                                  

9021121  Valve Manifold, Gripper, DCU              CNY                                  

9021054  Controller, Theta, DCU         CNY                                  

9021031  Frame, transfer module, Qsym            CNY                                  

9021024  Lid, waste box, AS, Qsym            CNY                                  

9020962  Notebook, small instruments         CNY                                  

9020729  Cooling adapter, MTP, RB, v2, Qsym          CNY                                  

9020710  Fan, electrical, 80mm, C34           CNY                                  

QY-x92   RH-35肝癌细胞                                      

QY-x93   SHZ-88乳腺癌细胞                                        

QY-x94   MLTC-1睾丸间质细胞瘤细胞    CRL-2065                                  【甲状腺肿瘤组织源性原代细胞总DNA】

QY-x95   L6565小鼠L6565白血病克隆细胞系                                          

QY-x96   F9畸胎瘤细胞      CRL-1720                                 

QY-x97   LLC Lewis肺癌细胞                                       

QY-x98   C127乳腺肿瘤细胞      CRL-1804                                 

QY-x99   MFC胃癌细胞                                        

QY-x100  B16黑色素瘤细胞        CRL-6322                                 

QY-x101  B16黑色素瘤细胞        CRL-6322                                 

QY-x102  P815肥大细胞瘤细胞   TIB-64                               

QY-x103  S-180腹水瘤细胞        CCL-8                                

QY-x104  RM-1前列腺癌细胞                                       

QY-x105  SAC-IIC3腹水瘤细胞                                     

QY-x106  NG108-15 [ 108CC15 ]小鼠神经细胞瘤与大鼠神经胶质瘤之融合细胞        HB-12317                                  

QY-x107  SAC-IIB2腹水瘤细胞                                     

QY-x108  Hepa 1-6肝癌细胞        CRL-1830                                 

QY-x109  P388D1淋巴瘤细胞     CCL-46                              

QY-x110  P3X63Ag8.653骨髓瘤细胞  CRL-1580                                  【甲状腺肿瘤组织源性原代细胞总DNA】

QY-x111  YAC-1淋巴瘤细胞        TIB-160                             

QY-x112  P3X63Ag8骨髓瘤细胞        TIB-9                                 

QY-x113  EL4. IL-2淋巴瘤细胞   TIB-181                             

QY-x114  SP2/0骨髓瘤细胞                                          

QY-x115  EL4淋巴瘤细胞    TIB-39                               

QY-x116  P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1]骨髓瘤细胞    TIB-18                               

QY-x117  PIEC猪髋动脉内皮细胞                                        

QY-x118  CRFK猫肾细胞     CCL-94                              

QY-x119  EBTr NBL-4牛胚气管细胞  CCL-44                              

QY-x120  F81猫肾细胞                                          

QY-x121  Mv.1.LuNBL-7貂肺上皮细胞      CCL-64                              

QY-x122  MDCK NBL-2狗肾细胞       CCL-34