【乳腺肿瘤组织源性原代细胞总DNA】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【乳腺肿瘤组织源性原代细胞总DNA】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【乳腺肿瘤组织源性原代细胞总DNA】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【乳腺肿瘤组织源性原代细胞总DNA】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9020997  ZS Pipetting Module, DCU           CNY                                  

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9239498  V-Housing, LX100         CNY                                  

9239490  EX Laser Driver, Uniphase           CNY                                  

9239390  PCR Plate Adapter, M96        CNY                                  

9236510  BR 3000, PM Service    The Overhaul covers all travel ａnd labor costs plus all necessary parts to perform a Preventative Maintenance,. The instrument will also be thoroughly checked ａnd inspected to determine if any additional parts are required to get the instrument running to its optimal performance. There will be an additional charge for any such parts if any are needed. CNY                                  

9232764  Disposable Troughs, 20 / 30 ml (10)    Troughs holding up to 20 ml of liquid; pack of 10       CNY                                  

9236472  BR 9600, Full Agreement       The Full Agreement 9600 provides full service coverage for the BioRobot 9600. Costs for service visits are fully covered including travel, labor, ａnd parts. The agreement also includes one annual preventive maintenance visit, with costs for labor ａnd parts covered. With a Full Agreement, there is a priority response time of 48 hours (2 working days).       CNY                            【乳腺肿瘤组织源性原代细胞总DNA】  

9236443  BR, Installation       The Installation, BR Universal facilitates the quick implementation of the BioRobot into the lab routine by minimizing the instrument start-up phase. It covers the hardware ａnd software installation of the BioRobot Universal instrument ａnd provides the user with an introductory training on operation ａnd user maintenance. The installation includes labor ａnd travel costs. The performance of the installation process is documented on a GMP/GLP-compliant Field Service document.    CNY                                  

9239155  Assembly, vertical axis, TWI        CNY                                  

9239108  Assy, Sample Needle, Actuator linkage         CNY                                  

9232693  MTP-Plate Holder  2.01              CNY                                  

9232629  Bottle, 500-ml, yellow fitting         CNY                                  

9232602  Vacuum manifold, plate holder bottomless           CNY                                  

9232579  Cooling block, 1,5ml             CNY                                  

9238951  Locking lever, BS15              CNY                                  

9238798  Rectangular bucket, sealable with cap          CNY                                  

9238794  Angle rotor 6 x 250 ml          CNY                                  

9016913  Tubing, press relief valve inlet DISU v2              CNY                                  

9238942  Keyboard-Display assembly, BS15        CNY                                  

9238753  Screwdriver, hex2mm, z-drive BR8             CNY                                  

9238916  Power supply 40W, BS96             CNY                                  

9238748  Coupling, CPC, screw, male, V2          CNY                                  

QY-x154  3T3-Swiss albino胚胎成纤维细胞      CCL-92                              

QY-x155  Mo-MuLv/3T3Mo-MuLv感染的3T3细胞                                    

QY-x156  MRC-5胚肺细胞   CCL-171                                   

QY-x157  WI-38胚肺细胞    CCL-75                              

QY-x158  FRhK-4恒河猴胚肾细胞      CRL-1688                                  【乳腺肿瘤组织源性原代细胞总DNA】

QY-x159  VERO C1008 E6非洲绿猴肾细胞       CRL-1586                                 

QY-x160  Pt K1 NBL-3长鼻袋鼠肾细胞     CCL-35                              

QY-x161  L1210白血病细胞        CCL-219                                   

QY-x162  Neuro-2A脑神经瘤细胞      CCL-131                                   

QY-x163  PC-12肾上腺嗜铬细胞瘤细胞    CRL-1721                                 

QY-x164  HeLa宫颈癌细胞                                     

QY-x165  A549 [A-549]肺癌细胞        CCL-185                                   

QY-x166  MCF7乳腺癌细胞        HTB-22                              

QY-x167  Hep 3B2.1-7肝癌细胞   HB-8064                             

QY-x168  MDA-MB-231乳腺癌细胞   HTB-26                              

QY-x169  Hep G2肝癌细胞   HB-8065                             

QY-x170  HCT 116结肠癌细胞    CCL-247                                   

QY-x171  22RV1前列腺癌细胞    CRL-2505                                 

QY-x172  HT-29结肠癌细胞        HTB-38                              

QY-x173  KG-1白血病细胞  CCL-246                                   

QY-x174  LoVo结肠癌细胞   CCL-229                                    【乳腺肿瘤组织源性原代细胞总DNA】

QY-x175  THP-1单核细胞白血病       TIB-202                             

QY-x176  SW620结肠癌细胞      CCL-227                                   

QY-x177  SK-N-SH神经母细胞瘤细胞       HTB-11                              

QY-x178  SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞       CRL-2266                                 

QY-x179  COLO 205结肠癌细胞        CCL-222                                   

QY-x180  T/G HA-VSMC人主动脉血管平滑肌细胞  CRL-1999                                 

QY-x181  HUVEC人脐静脉血管内皮细胞  CRL-1730                                 

QY-x182  A10大鼠主动脉血管平滑肌细胞        CRL-1476                                 

QY-x183  3T3-L1小鼠脂肪细胞   CL-173                              

QY-x184  A9皮下结缔组织细胞  CRL-1811