【宫颈肿瘤组织源性原代细胞总DNA】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【宫颈肿瘤组织源性原代细胞总DNA】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【宫颈肿瘤组织源性原代细胞总DNA】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【宫颈肿瘤组织源性原代细胞总DNA】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9015528  Board, power branching        CNY                                  

9015527  Board, operation panel           CNY                                  

9021234  Vacuum Pump (100 V), PyroQ24VW          CNY                                  

9021114  Skin Panel, Waste Drawer, DCU          CNY                                  

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9020996  Vial Robot Assist Assembly, DCU         CNY                                  

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9020234  Z-pulley, idler ass., 8 ch. gearbox, Cx8        CNY                                  

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9232820  Mikrowin data reduction Software              CNY                                  

9232807  Cal. Set for Reader 3 000 12 00           CNY                                  

9236528  Manual, user, QS 4.1 (WW)         CNY                                  

9236486  #Agreement, Plato 3, PM, 1 yr      An agreement for preventive maintenance provides coverage for travel, labor, ａnd parts, plus the cost of consumables required for the maintenance visit. Work carried out during the preventive maintenance visit is fully documented in accordance with GMP/GLP directives. CNY                                  

9236446  Travel Charge, zone A           CNY                                  

9236439  1.0 hr             CNY                                  

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9019142  X/Y table, PyroQ96ID           CNY                                  

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9019127  Heating block, PyroQ96ID           CNY                                  

9019027  Pin, piercing, EZ1          CNY                                  

9019026  Worktable, side wall, right, EZ1xl         CNY                                  

9018959  Master Mix Block, 5x5ml Tubes          CNY                            【宫颈肿瘤组织源性原代细胞总DNA】  

9018952  Reagent Block, 16x0.2ml/1.5ml PCR/FlatBa        CNY                                  

9018941  Adapter, COBAS TaqMan 48 Plates             CNY                                  

QY-x248  人肺动脉平滑肌细胞                                      

QY-x249  人肺动脉成纤维细胞                                      

QY-x250  人肺泡上皮细胞                                      

QY-x251  人支气管上皮细胞                                         

QY-x252  人气管上皮细胞                                      

QY-x253  人小气道上皮细胞                                         

QY-x254  人肺成纤维细胞                                      

QY-x255  人支气管平滑肌细胞                                       【宫颈肿瘤组织源性原代细胞总DNA】

QY-x256  人气管平滑肌细胞                                         

QY-x257  人肝窦内皮细胞                                      

QY-x258  人肝内胆管上皮细胞                                      

QY-x259  人肝细胞                                         

QY-x260  人肝星形细胞                                         

QY-x261  人肾小球内皮细胞                                         

QY-x262  人肾小管上皮细胞                                         

QY-x263  人肾皮质上皮细胞                                         

QY-x264  人肾脏上皮细胞                                      

QY-x265  人肾系膜细胞                                         

QY-x266  人食管上皮细胞                                      

QY-x267  人食管平滑肌细胞                                         

QY-x268  人肠微血管内皮细胞                                      

QY-x269  人肠平滑肌细胞                                      

QY-x270  人结肠平滑肌细胞                                         

QY-x271  人真皮微血管内皮细胞                                          【宫颈肿瘤组织源性原代细胞总DNA】

QY-x272  人真皮淋巴内皮细胞                                      

QY-x273  人表皮角质细胞-新生                                    

QY-x274  人表皮角质细胞-成人                                    

QY-x275  人表皮黑色素细胞-浅                                    

QY-x276  人表皮黑色素细胞-中                                    

QY-x277  人表皮黑色素细胞-深                                    

QY-x278  人真皮成纤维母细胞-胎儿