【肠平滑肌细胞总DNA】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【肠平滑肌细胞总DNA】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【肠平滑肌细胞总DNA】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【肠平滑肌细胞总DNA】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

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9013425  Maintenance Kit BR 9604      "See Components tab for what comes in this kit.

Also includes 4x9013641, BGR Valve 4-port for P1/3 Syringe Pump; 1.5m of 9233214 (listed in Components as qty of 1)." CNY                            【肠平滑肌细胞总DNA】  

9019668  PCB - Valve, PyroQ24           CNY                                  

9019649  Fuse kit (6.3Ax10, 5Ax5), PyroQ96            CNY                                  

9019602  Home flag, Y-axis, Cx8          CNY                                  

9019599  Housing, filter seal, CX1              CNY                                  

9019585  Slideout electrical tray, QGY         CNY                                  

9019547  Fan guard ａnd filter, Cxx              CNY                                  

9019532  Tip ejector, QGY           CNY                                  

204163    QuantiTect SYBR Green PCR +UNG Kit (200)    The supplied, ready-to-use ｍaster mix contains SYBR Green I dye, ROX passive reference dye, HotStarTaq DNA Polymerase, ａnd a dNTP mix in an optimized buffer. The dNTP mix includes dUTP, allowing optional treatment with UNG. The UNG enzyme is provided separately. For convenience, the ｍaster mix can be stored at 2–8°C.       CNY                                  

204141    QuantiTect SYBR Green PCR Kit (40)  "Trial kit size for 40 x 50 ul reactions: 1.7 ml QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix, 2.0 ml RNase-free water

For quantitative, real-time PCR ａnd two-step RT-PCR using SYBR Green detection."       CNY                                  

9019428  Sensor, source home, RG3           CNY                                  

9019397  Belt, toothed, rotor drive, RG3             CNY                                  

9019350  Heater assembly, element, sensors, RG6             CNY                                  

1027415  FlexiTube siRNA 1 nmol              CNY                                  

9019336  Connector, JP5, Hi, Med, Lo, RG6              CNY                                  

QY-x580  L1210小鼠淋巴细胞白血病                                   

QY-x581  RBL-1大鼠嗜碱性粒细胞白血病                                   

QY-x582  MV-1-Lu鼬肺上皮细胞                                         

QY-x583  NIH3T3小鼠胚胎成纤维细胞                                        【肠平滑肌细胞总DNA】

QY-x584  293人胚肾细胞                                       

QY-x585  L929小鼠成纤维细胞                                     

QY-x586  293T人胚肾T细胞                                        

QY-x587  HSC-T6大鼠肝星状细胞                                       

QY-x588  GES-1人胃粘膜细胞                                      

QY-x589  L-02人肝细胞                                         

QY-x590  Lewis肺癌细胞                                       

QY-x591  EAC艾氏腹水瘤细胞                                     

QY-x592  LA795肺腺癌细胞                                         

QY-x593  S180腹水瘤细胞                                     

QY-x594  H22肝癌细胞                                   

QY-x595  B16黑色素瘤细胞                                   

QY-x596  MPC-83胰腺腺泡癌细胞                                       

QY-x597  C3白血病细胞                                        

QY-x598  RIN-m5Fβ胰岛素瘤                                      

QY-x599  L1210淋巴白血病细胞                                    【肠平滑肌细胞总DNA】

QY-x600  MA891乳腺癌细胞                                        

QY-x601  TA2自发高乳腺癌细胞                                         

QY-x602  SP2/0骨髓瘤细胞                                   

QY-x603  U14宫颈癌细胞                                      

QY-x604  YAC-1淋巴瘤细胞                                   

QY-x605  G422神经胶质瘤细胞                                    

QY-x606  TC-1HPV16，E6,E7和ras基因共转化的C57BL/C(H-2b)小鼠肺上皮细胞                                      

QY-x607  SRA01/04人晶体上皮细胞系                                        

QY-x608  MCF-7乳腺腺癌细胞                                     

QY-x609  CNE-1高分化鼻咽癌细胞                                      

QY-x610  MEF-7/Adr乳腺腺癌阿霉素耐药株