【骨细胞总DNA】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【骨细胞总DNA】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【骨细胞总DNA】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

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【骨细胞总DNA】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9014579  QIAVac Multiwell    Vacuum manifold for processing 96-well purification plates of SBS standard     CNY                                  

9022581  PCB - Mainboard(progr.)Biocontrol,RGQII         CNY                                  

9022409  RCS Tip Eject Station v.2             CNY                                  

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9021983  Latching mechanism (2), top lids, QXA              CNY                                  

9021290  Silicone grease for PM, EZ1         CNY                                  

9238617  Magnet, tacho        CNY                                  

9238473  Rotary flex circuit, BR RapidPlate        CNY                                  

9238240  BioRobot M48 User Manual          CNY                            【骨细胞总DNA】     

9238225  Sheath Delivery Tubing w. Connectors        CNY                                  

9238158  Heat Transfer Adapter, microplate FB          CNY                                  

9240660  Block, Plastic, QC, AP96/196              CNY                                  

9240651  Internal BCR, Keyence, BL-180, AP96/196          CNY                                  

9240626  Fuse, 8amp, 5 X 20 mm, AP196/98             CNY                                  

9240623  Circuit Breaker, 2A, AP196/98             CNY                                  

9240591  3-Way Mac Valve, AP196/96         CNY                                  

9240574  Micro-Lynx w\speedbaord, AP98         CNY                                  

9240572  Rotor w/Buckets, Sorvall, AP96           CNY                                  

9240552  Freq. Conv., PCB, Eppendorf, AP196/98             CNY                                  

9240531  Cable, Motor, Axis #7, Pump U/D, AP98             CNY                                  

9240564  Fan, Condenser, 230V,Eppendorf, AP196/98        CNY                                  

9240553  Cable, PC-104 to Eppendorf, AP196/98              CNY                                  

9240548  Motor Cap Repair, Eppendorf, AP196/98             CNY                                  

9240515  I/O PCB, Main Board, AP196/98          CNY                                  

9240503  PM Kit, AP196              CNY                            【骨细胞总DNA】     

9239958  BR M48, PM Service     "Service response time (repair): not applicable

Periodic inspection/maintenance: yes

 Inspection/maintenance delivery: onsite

Cost coverage for Repair Parts : not included

Cost coverage for labor: yes, full coverage

Cost coverage for travel: yes, full coverage

Replacement system (Loaner) provision: not applicable

Transportation cost coverage: yes, full coverage" CNY                                  

9239853  Foot, complete, v2.0 (4)              CNY                                  

9239572  BR Universal, Full Agreement The Full Agreement BR Universal provides full service coverage for the BioRobot Universal System. Costs for service visits are fully covered including travel, labor, ａnd parts. The agreement also includes one annual preventive maintenance visit, with costs for labor ａnd parts covered. With a Full Agreement, there is a priority response time of 48 hours (2 working days).       CNY                                  

9239563  Assy,Kit,Retrofit,HoriCompressorMnt          CNY                                  

9020033  LED UV (325), RGQ            CNY                                  

9020023  L 26_7 Firmware, DML2             CNY                                  

9019975  PCB, UV light assembly, Cxx        CNY                                  

QY-x859  BHK-21叙利亚仓鼠肾细胞系                                        

QY-x860  CHO-K1中国仓鼠卵巢细胞系                                       

QY-x861  P3/NS1/1-Ag4-1鼠骨髓瘤细胞                                      

QY-x862  SP2/0-Ag14鼠骨髓瘤细胞                                     

QY-x863  P3X63-Ag8.653鼠骨髓瘤细胞                                      

QY-x864  B6YH4杂交瘤细胞（B6YH4）枝原体阳性                                         

QY-x865  B82鼠细胞系                                   

QY-x866  CoC1人卵巢癌细胞系                                    

QY-x867  CoC1/DDPCoC1细胞耐药亚株                                     

QY-x868  Hep-2人喉癌细胞系                                       

QY-x869  KMB-17人二倍体细胞系                                       

QY-x870  WI-38人二倍体细胞系                                   

QY-x871  MRC-5人二倍体细胞系                                         【骨细胞总DNA】

QY-x872  HL人二倍体细胞系                                        

QY-x873  Hela人宫颈癌细胞系                                      

QY-x874  Hela/DDP Hela细胞耐药亚株                                         

QY-x875  H9人T淋巴细胞系                                        

QY-x876  K562慢性骨髓性白血病细胞系                                    

QY-x877  Wish人羊膜细胞系                                        

QY-x878  HL-60早幼粒急性白血病细胞系                                   

QY-x879  MOLT-4淋巴母细胞性白血病细胞系                                   

QY-x880  A431表皮癌细胞系                                        

QY-x881  L-02人胎肝细胞系                                         

QY-x882  Hut-102人T淋巴瘤细胞系                                    

QY-x883  MCF-7人乳腺癌细胞系                                         

QY-x884  ZR-75-30人乳腺癌细胞系                                     

QY-x885  PK-15猪肾细胞系                                   

QY-x886  IBRS-2猪肾细胞系                                        

QY-x887  ST猪睾丸细胞系                                     【骨细胞总DNA】

QY-x888  Sf-21昆虫细胞系                                    

QY-x889  SF-9昆虫细胞系