【胰腺导管上皮细胞总DNA】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【胰腺导管上皮细胞总DNA】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【胰腺导管上皮细胞总DNA】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【胰腺导管上皮细胞总DNA】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9019340  LED, blue (470), RG6           CNY                                  

9019236  Bearing, PyroQ24          CNY                                  

9020462  PMT, GSC            CNY                            【胰腺导管上皮细胞总DNA】  

1026901  MagAttract Suspension G (13/15),KG  13 ml volume of suspension G      CNY                                  

9233576  Label, Biorobot3000              CNY                                  

9019229  Memory Card, PyroQ24        CNY                                  

9019215  Cog belt kit - Robot, PyroQ96MD        CNY                                  

9019214  PCB - Shutter, PyroQ96MD         CNY                                  

9019208  Cable - Y  robot, PyroQ96MD            CNY                                  

1066850  AIV-H7 RT-PCR REAGENT LE           CNY                                  

9232904  YZ-CPU Board              CNY                                  

1061082  CT PCR REAGENT I           CNY                                  

1061107  PG AIV-H9 RT-PCR Assay (48) Z        CNY                                  

1061112  HIV-1 RT-PCR REAGENT I         CNY                                  

1061114  AIV-H7 RT-PCR REAGENT         CNY                                  

9016652  Vacuum Trap Bottle 4l, UTP         CNY                                  

9016420  Tubing Sys., Bottle, BR8 RD UTP        CNY                                  

9016271  Maintenance Kit, BR MDx v2              CNY                                  

9016268  Upgrade Kit, DISU, BR8000         CNY                            【胰腺导管上皮细胞总DNA】  

9016237  Bag for Waste Container        CNY                                  

9016122  Maintenance Kit, RoboVac, BR8000 I,SBS          CNY                                  

9019176  Window, PyroQ96MD          CNY                                  

9011840  Set, Tubing, PeristalticPump, In/Out, P3             CNY                                  

9019137  Reagent chamber lid, PyroQ96ID         CNY                                  

9019120  PCB  5 - Connection, PyroQ96ID              CNY                                  

9019111  PCB - Interconnection, PyroQ96ID             CNY                                  

9019084  PyroMark Q96 ID Software (5)    For use with PyroMark Q96 ID instrument.Software for setting up a run ａnd analyzing mutations ａnd sequence identification.  CNY                                  

9019063  PyroMark Q24 MDx Software      For methylation ａnd mutation analysis using Pyrosequencing technology in 24 well CE-marked.    CNY                                  

9019020  Coupling, Z axis, EZ1xl         CNY                                  

9019019  Coil, EZ1xl            CNY                                  

9019005  Door lock assembly, EZ1xl           CNY                                  

9022710  Enclosure, Silver, DML3000         CNY                                  

9016069  Maintenance Kit, RoboVac, BR8000 II         CNY                                  

QY-x1076       人肺腺癌细胞（胸膜渗出液）Calu-3                                   

QY-x1077       人肺癌细胞系（未分化）Calu-6                                   

QY-x1078       人胚肺二倍体细胞HLF-02                                    

QY-x1079       人肺癌细胞系Tul-1                                         【胰腺导管上皮细胞总DNA】

QY-x1080       人胚肺成纤维细胞HFL-I                                       

QY-x1081       人胚肺细胞MRC-5                                        

2QY-x1082     人胚肺细胞WI-38                                         

QY-x1083       人SV－40转化肺成纤维细胞 WI－38AV13                                       

QY-x1084       人肺癌亚历山大细胞系PLC/PRF/5                                      

QY-x1085       人肺巨细胞癌(PG)的低转移亚系PG-LH7                                    

QY-x1086       人肺巨细胞癌(PG）的高转移亚系PG-BE1                                         

QY-x1087       人肺腺癌细胞系PG49                                    

QY-x1088       人肺腺癌细胞GLC-82                                    

QY-x1089       人肺巨细胞癌细胞HLAmP                                    

QY-x1090       人肺腺癌细胞（转染TK基因的GLC-82细胞）GLC-82-TK                                    

QY-x1091       人胚肺成纤维细胞突变癌细胞Z-HL16C                                      

QY-x1092       人肺动脉内皮细胞HPAEC                                     

QY-x1093       人肺泡上皮细胞HPAEpiC                                      

QY-x1094       人胚肺成纤维细胞CCC-HPF-1                                     

QY-x1095       人低分化肺腺癌细胞SK-LU-1                                       【胰腺导管上皮细胞总DNA】

QY-x1096       人肺鳞癌细胞LTEP-s                                     

QY-x1097       人小细胞肺癌细胞LTEP-sm                                         

QY-x1098       人小细胞肺癌细胞LTEP-P                                    

QY-x1099       人肺癌细胞973                                       

QY-x1100       人胚肺成纤维细胞　HELF                                    

QY-x1101       人低转移肺癌细胞95-C                                        

QY-x1102       人高转移肺癌细胞95-D                                        

QY-x1103       人肺腺癌细胞A2                                    

QY-x1104       人支气管上皮细胞HBE                                         

QY-x1105       人支气管上皮细胞16HBE                                      

QY-x1106       人肾癌细胞Ketr-3