【气管上皮细胞】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【气管上皮细胞】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【气管上皮细胞】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【气管上皮细胞】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9020062  Brake 205V DC, TLyser        CNY                                  

9020055  Motor 100-115V 50/60 Hz, TLyser              CNY                                  

9020053  Motor 220-240V 50/60 Hz, TLyser              CNY                                  

9014868  Motor, W-Drive, BR8RD              CNY                                  

9014776  PC98, BR8 RD v1.0             CNY                                  

9014645  System Reagent Trough Lids (Qty 4)          CNY                                  

9014563  Base Plate, Robovac, BR8 RD v4.2             CNY                                  

9014515  Pulley Overhead, BR8, RD v1.0           CNY                            【气管上皮细胞】      

9022598  Cover, VELA, RGQ              CNY                                  

9022474  Shipment Box, careHPV        CNY                                  

9022183  LC-Display incl. Backlight            CNY                                  

9022124  Tool, fluorescent bead 72well rotor, RGQ           CNY                                  

9238616  Buffer 20/30, Zent3              CNY                                  

9238476  Compression ring caps, RapidPlate              CNY                                  

9238421  Installation, BR, Standard Solution        CNY                                  

9238244  User Manual BR EZ1            CNY                                  

9237924  Meter, Tension, Sonic, 507C         CNY                                  

9240659  Rebuild Kit, Pump, Jun-Air, AP            CNY                                  

9240650  Cable, Barcode, Keyence BL601, AP196/98         CNY                                  

9240648  Cable, Barcode, MS-3 CCD, AP196/98        CNY                                  

9240645  External BCR, Metrologic, MS6720, AP              CNY                                  

9240627  Fuse, 10amp, 5 X 20 mm, AP196/98           CNY                                  

9240620  Relay, DPST 24VCD, AP96          CNY                                  

9240595  MAC Valve, Manifold, Vacuum, AP98          CNY                            【气管上皮细胞】      

9240592  Unload Valve, Vacuum Pump, AP196/98              CNY                                  

9240565  Fan, Motor, 230V, Eppendorf AP196/98              CNY                                  

9240555  Motor Cover, Rubber, Eppendorf, AP196/98        CNY                                  

9240510  Cable Kit, PC104, AP196/98         CNY                                  

9240501  PM Kit, AP98         CNY                                  

9240372  QIASymphony SP, Installation      The Installation, QIAsymphony SP facilitates the quick implementation of the QIAsymphony into the lab routine by minimizing the instrument start-up phase. It covers the hardware ａnd software installation of the QIAsymphony instrument ａnd provides the user with an introductory training. The installation includes or labor ａnd travel costs. The performance of the installation process is documented on a GMP/GLP-compliant Field Service document.    CNY                                  

9239960  Upgrade App., BR MDx DSP Tube-Ring PCR             CNY                                  

9239850  Adapter, XYP to LC200         CNY                                  

9019943  Cable, P-axis ribbon, 8 ch. , CX1         CNY                                  

QY-x1380       小鼠白血病克隆细胞系L6565                                      

QY-x1381       小鼠白血病细胞G-CSF依赖性NFS-60                                       

QY-x1382       小鼠肥大细胞癌细胞P815                                     

QY-x1383       小鼠肺癌细胞Lewis                                       

QY-x1384       小鼠肺癌细胞LLC                                         

QY-x1385       小鼠胃癌细胞MFC                                        

QY-x1386       小鼠艾氏腹水癌细胞EAC                                     

QY-x1387       小鼠腹水瘤细胞SAC-II B2                                    

QY-x1388       小鼠腹水瘤细胞SAC-II C3                                    

QY-x1389       小鼠乳腺癌高转移细胞MA-891                                    

QY-x1390       小鼠乳腺肿瘤细胞C127                                        

QY-x1391       大鼠乳腺癌细胞SHZ-88                                        

QY-x1392       小鼠骨髓瘤细胞SP2/0                                   

QY-x1393       鼠骨髓瘤细胞SP2/0-Ag14                                     

QY-x1394       小鼠骨髓瘤细胞P3-X63-Ag8.653                                          【气管上皮细胞】

QY-x1395       小鼠骨髓瘤细胞P3/NSI/1-Ag4-1[NS-1]                                       

QY-x1396       小鼠骨髓瘤细胞FO                                       

QY-x1397       小鼠淋巴瘤细胞Yac-1                                    

QY-x1398       小鼠淋巴瘤细胞EL4                                      

QY-x1399       小鼠淋巴瘤细胞EL4.IL-2                                      

QY-x1400       小鼠黑色素瘤细胞B16F1                                      

QY-x1401       鼠黑色素瘤细胞系B16-Fo                                     

QY-x1402       小鼠黑色素瘤高转移细胞B16F10                                        

QY-x1403       小鼠黑色素瘤细胞B16BL6                                    

QY-x1404       小鼠黑色素瘤细胞B16                                   

QY-x1405       小鼠SRSV转化的3T3细胞SRSV/3T3                                       

QY-x1406       小鼠胚胎成纤维细胞BALB/3T3 clone A31                                   

QY-x1407       小鼠肝癌细胞H22                                   

QY-x1408       小鼠肝癌细胞Hepa 1-6                                   

QY-x1409       大鼠肝癌细胞CBRH-7919                                     

QY-x1410       大鼠肝癌细胞RH-35                                       【气管上皮细胞】