【心肌成纤维细胞】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【心肌成纤维细胞】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【心肌成纤维细胞】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【心肌成纤维细胞】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9011875  ZLV Vacuum Trap         CNY                                  

9016874  Kit, Maint. Prot. Plasticware, BR UNIV              CNY                                  

9232338  Cable, RS232, internal chain, BR8000          CNY                                  

9238945  H-motor, BS15              CNY                            【心肌成纤维细胞】   

9238927  Linear conductor, BS15         CNY                                  

9238767  Swing-out rotor for microplate, sealable              CNY                                  

9238755  24 Well Cooling Block 1,5ml         CNY                                  

9238913  Power supply 40W, BS96             CNY                                  

9232323  Cable, power, liquid pump, BR8000             CNY                                  

9232126  Connector, base, dispenser head, BR8000           CNY                                  

9238695  Voltage regulator 7805 DC, 5 V            CNY                                  

9231780  Cable, BioRobot to vac.control box, 1500           CNY                                  

9238676  Lid, speed measurement        CNY                                  

9231514  Screw, 3-way dilutor valve, BR8000            CNY                                  

9231009  Flex Cable 2x10P YQCon1 - Yzadp              CNY                                  

9230995  Predilutionrackaufnahme re.  PK-80           CNY                                  

9020080  Ratchet Holder Set (L&R), TLyser              CNY                                  

9020076  Left Rocker Arm, preassemblied, TLyser            CNY                                  

9020067  Front Panel, TLyser 2           CNY                                  

9020064  Brake 105V DC, TLyser        CNY                            【心肌成纤维细胞】   

9020057  Fan Blade, TLyser         CNY                                  

9020049  Cover with magnet, TLyser          CNY                                  

9015005  DT- Adapter, 300µl, BR8 v3.03            CNY                                  

9014944  AC-Box, 1000W, BR8 RD v1.0            CNY                                  

9014878  Card, x-main, shaker            CNY                                  

9014840  Tubing Set, Syringe Inlet, BR8 RD              CNY                                  

9014712  Cable, Rotor Door Lock, BR8 RD        CNY                                  

9014634  PCB, Rotor-Edge, BR8 RD           CNY                                  

9238607  Teflon disc, motor bearing protection          CNY                                  

9238220  Clamp Tubing        CNY                                  

9240669  Male Quick Disconnect, AP          CNY                                  

9240606  Vacuum Gauge, Digital, AP196/98        CNY                                  

9240601  Sensor w/Cable, Reagent Jar, AP96/196              CNY                                  

QY-x1504       中国仓鼠仓鼠肺细胞R1610                                   

QY-x1505       绿猴猴脉络膜-视网膜(内皮)细胞RF/6A                                      

QY-x1506       大鼠雪旺细胞RSC96                                      【心肌成纤维细胞】

QY-x1507       猪睾丸细胞系(ST)ST                                     

QY-x1508       蝙蝠肺细胞Tb 1 Lu                                       

QY-x1509       小鼠B细胞杂交瘤细胞W6/32                                      

QY-x1510       鼠纤维肉瘤细胞系WEHI 164                                       

QY-x1511       小鼠B淋巴细胞WEHI 231                                    

QY-x1512       大鼠垂体细胞RPC                                         

QY-x1513       小鼠垂体细胞MPC                                        

QY-x1514       兔子垂体细胞                                         

QY-x1515       狗垂体细胞                                      

QY-x1516       鼠肝癌细胞系MM45T.Li                                       

QY-x1517       小鼠成纤维细胞系McCoy                                     

QY-x1518       大鼠肝癌细胞（乳腺癌细胞接种到肝脏成瘤）Walker-256                                       

QY-x1519       大鼠肝癌细胞（wistar 大鼠）CBRH7919                                    

QY-x1520       小鼠结肠癌C26                                      

QY-x1521       稳定转染了neor和LIF基因的STO细胞株SNL                                       

QY-x1522       小鼠艾氏腹水瘤细胞ECA                                      【心肌成纤维细胞】

QY-x1523       褐鼠胰岛素瘤上皮细胞RIN-m                                     

QY-x1524       小鼠杂交瘤细胞ST2/o                                   

QY-x1525       小鼠肾癌细胞RenCa                                      

QY-x1526       小鼠胰岛素瘤β细胞（NOD/Lt转基因小鼠，SV40巨T抗原）NIT-1                                    

QY-x1527       早代小鼠胚胎成纤维细胞MEF                                     

QY-x1528       中国仓鼠肺细胞V79                                      

QY-x1529       兔的肝细胞VX2                                     

QY-x1530       鸡胚原代肝细胞CEL                                      

QY-x1531       129小鼠ES细胞D3                                       

QY-x1532       129小鼠ES细胞E14                                     

QY-x1533       BALB/c小鼠ES细胞B/c-ES                                         

QY-x1534       猴的骨髓间充质干细胞MSCS