标题运用进样液相色谱仪测定尿中肌酐和尿酸

1 实验部分

1．I 仪器和试剂 高效液相色谱仪 ，51o型输液泵及 U6K进样器（Waters公 司，美国），SPD-1A型紫外检测器 （日本岛津），2O66型笔式记 录仪（重庆仪表总厂）  色谱柱 ：150哪nx4 6哪n不锈钢柱填充本室台成的聚氧化 乙烯交联  氨基丙基固定相（5  ）。尿酸（Slg~ 公司）和肌酐 （Merck公 司）均为生化试剂 ，实验用水 为二次 蒸馏水 ，其它试 剂为分析纯。流动相用耐酸玻璃砂漏斗（  ）过滤并脱气 。

1．1 标准溶液的制备 肌酐和尿酸标准储备渡（1 g／L）按文献方法制备 ，可在冰箱中保存一个月。肌酐和屎酸标 准溶液及混台标准溶液（1∞ r  L）：取适量体积的相应标准储备液 ，用水稀释至所需浓度 ，使用前新鲜配制 。

1．2 分析条件 流动相 ：0．ol rad／L磷酸盐缓冲溶液 10％甲醇，pH=4．81。流速 1 mIJmin。检测波长 125 ran。灵敏度 0．16 Atrrs（输出电压 10 mY）。色谱分析温度为室温，以溶剂峰测定死时间。

1．4 定性殛定方法 采用外标法 ，以峰高定量。

2 结果与讨论

2．1 检潮波长的选择 在 110 180-皿波长范围测定肌酐和尿酸的紫外吸收，两物质均在 125舢 有高吸收，故确定检测波长 125 IlIn。

2．1 流动相的选择 因分析 Ig标为尿中肌酐和尿酸 ，所以选择流动相含 0．01 rad／L磷酸盐缓冲液，使分析条件较温和。考察不同 pH的流动相对两物质分离的影响 ，在 pH=4．81附近，肌酐和尿酸分 离度好。流动相中甲醇浓度对分离也有影响，选择 10％的甲醇含量时，两物质有好的分离度。在所选择的分析条件下 ，无杂质峰干扰肌酐和尿酸的检测。

2．2 工作 曲线、检测限及线性范 围 将不 同浓度的标准溶液分别进样 ，进样体积 10  ，以峰高对进样量 （坞） 作线性回归如下 ：肌酐 y：1．19+161．75z，相关系数 r= 1．0000；屎酸 Y=4．14+171．8 z，相关系数 r= 0．9999。用逐级稀释法，在 0．01AUFS时 ，按信噪 比为 2倍计测得检测限 ：肌酐，1  L-尿酸 ，2  Lo线性范围： 肌酐 ，1～1×1  L；屎酸 ，2～1×1  ／Lo

2．4 回收辜及 精 密度  将 不 同量 的肌 酐 和屎 酸标 准溶 液加 人稀 释 的尿样 作色谱 分 析 ，回收率 ：肌酐， 101．0％ ．RSD=2．00go（n=8）；尿酸，96．17％ ，RSD=1．97％（n：8）。

2．5 样 品测定 取正常人新鲜屎样用水稀释 10倍 ，进样 1  ，对 8份尿样进行分析，每份平行测定 2～5次， R蚰 <6％。样品攫I定结果：肌酐，0．78—1．77 g／L；尿酸 0．18—0 62 k 样品测定结果与文献报道的正常范围相符，谱分析时问不超过 6 ndn。

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