标题waters高效液相色谱仪检测人血浆中全反式维甲酸血药含量

1实验所用的仪器设备

Waters高效液相色谱仪（515型恒流泵，486型紫外检测器，Millennium32色谱工作站）；xw__80A旋涡混合器；3K18高速冷冻离心机；高速离心机。

2 色谱条件

色谱柱为Supelcosil LC-18DB柱（5 Ixm，4．6 mm×250 mm）；柱温为室温。流动相 ：甲醇-水-冰乙酸（体积比82：17：1）；流速 1．5 mL·min 。检测波长 340 nm。

3 血药浓度测定法

3.1  ATRA对照溶液配制 精密称取 ATRA对照品适量，以甲醇溶解并定容，制得浓度为 100 Ixg·mL的ATRA储备液。将 ATRA储备液以甲醇稀释，配制浓度 分别 为 0．5、l、2．5、5、l0、25、50  g·mL 的ATRA对照溶液。

3.2 内标液配制 取内标阿维 A酸适量，置于 100mL量瓶中，以甲醇溶解并定容，制得浓度为7．5 g·mL 的内标液。

3.3 样本处理 精密吸取血浆样品l mL，置 10 mL具塞离心试管中，加入内标溶液 20 L，旋涡混合 30 S。加入 1 mol·L 的HC1溶液500 IxL，漩涡混合 30 S，再加入乙酸乙酯 3 mL，旋涡混合 1 min，4 500 r／min离心5 min。转移上层液至尖底试管中，于 37 qC水浴中氮气流吹干。残渣加入流动相200 IxL漩涡混合30 s使溶解，l0 000 r／min离心 5 min，取上清液 50  进样，记录色谱图，以 ATRA峰面积（As）与内标峰面积（Ai）之比代入标准曲线计算 ATRA血药浓度。

3.4 标准曲线 精密量取空白血浆 1 mL，置 10 mL具塞离心管中，分别加入不同浓度 ATRA对照溶液 20 L，混匀 ，使血药浓度分别为 10、2O、50、100、200、500、 1000 ng·mL～。按样本处理方法操作，以不 同浓度ATRA系列溶液的A 和 A 来计算A（A=A ／Ai），以A

值为纵坐标，ATRA质量浓度（P）为横坐标进行直线回归。

4 讨 论

本文建立了一种灵敏、准确的ATRA血药浓度高效液相色谱测定法，适用于 APL病人 ATRA血药浓度的常规监测及临床药代动力学研究。通过监测 ATRA血药浓度 ，可以更好地了解在某些 APL病人连续用药治疗中临床复发及耐药的原因。ATRA化学性质活泼，见光易异构化或氧化降解，因此在样品提取过程中应特别注意避光操作。提取过程中血浆加入 1 mol·L HC1溶液，使血浆酸化，可提高萃取 回收率 ，乙酸乙酯一步萃取可使萃取回收率达到80％以上。