液相色谱柱/如何解决色谱柱使用过程中出现的问题

    专业的色谱仪（气相色谱仪、液相色谱仪、高效液相色谱仪）及配件制造与销售商-南京科捷,为您提供性价比优越的气相色谱仪、液相色谱仪、高效液相色谱仪、顶空进样器让您的分析工作省时而高效.

一、保留值与分离度重现性不好原因分析

原因                                         表现

不同色谱柱间差异使用期间柱的变化             填料，键合相不同柱床破坏键合相丢失硅胶基质溶解，强保留分堆积堵塞               保留因子（K）分离子（）柱效（N）

                                             保留因子（K）柱效（N）

柱外效应                                     系统差易，进样量大，进样0与色谱柱之间，色谱柱与检测器之间管路太长，检测器流通池体积大，接头死体积大等         注效（N）

问题              原因                       表现

分离效果变差      流动相组分改变             保留因子（K）柱效变化很小

                  流速改变                   保留因子（K）  分离因子

                  温度改变                   保留因子（K）柱效变化很小

柱平衡慢          重新平衡时间不够           保留因子（K）柱效变化很小

柱超载            样品量太大                 保留因子（K）  注效（N）

二 、造成色谱峰（不对称）拖尾的原因

1.色谱柱本身填装问题，筷板堵塞或填料塌陷  

2.柱头有污染；

3样本超载；

4样品溶剂不合适]

5.柱外效应

6化学或二次保留（硅基）效应

7缓冲容量不足或不合适

8重金属污染

三、如何解决峰形拖尾的问题

A.   与化学有关的拖尾问题

1  .流动相中，加入30MM的三乙胺（用与碱性化合物）或醋酸胺（用与酸性化合物），未知化合物加醋酸三乙胺

2如然拖尾，将三乙胺换为二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；

3.降低进样量至〈1UG。

B．与色谱柱有管的拖尾问题

1如柱头处有强保留的样品组分积聚，反相柱可用20倍柱体积的96%的二碌甲烷与4%甲醇，家1%氢氧化铵混合液冲洗，正向柱可用甲醇冲洗。

2.使用保护柱

C.与HPLC 系统有关的蜂拖尾和峰加宽

1.进样体积过大，通常〈25UL〉

2.进样0与色谱柱及检测器之间的管路体积过大（最佳连接管应〈20CM，内径为0.007〉

3检测器流通池的体积过大

四、如何储存色谱柱

1防止缓冲溶液和水溶液流动相产生微生物，做到流动相用多少配多少，或在水流动相中加200PPM的叠0钠以抑制细菌成长（一定当心其毒性和潜在的爆炸性）；或在流动相中家20%的有机改性剂，也可抑制微生物生长，有机改性剂还有助于流动相脱气。

2.尽可能将色谱柱储存于100%有机溶剂（乙晴最好）中，避免在缓冲溶液中保存。

3.使用缓冲溶液后的色谱柱，应用15`20陪柱体积的不含缓冲剂的同种水—有机溶剂流动相冲洗色谱柱，后换成100%有机溶剂储存。

4避免用纯净水冲洗键合致密的C18柱。

5将色谱柱的两端用堵有拧好，以免柱床填料干裂。