赭曲霉毒素检测试剂盒

赭曲霉毒素检测试剂盒
适用
Beacon赭曲霉检测试剂盒利用竞争酶联免疫吸附原理定量检测赭曲霉毒素

检测原理
Beacon赭曲霉检测试剂盒是基于竞争性酶联免疫吸附检测法。用甲醇水震荡萃取粉碎样品中的赭曲霉毒素，过滤萃取物，然后进行免疫学检测。加入赭曲霉的酶标记物到已加有标准或样品的测试孔中，抗体被加入后反应开始，样品及酶标记物竞争结合连接在微孔上的抗体，10分钟培养后，倒掉孔中的溶液，洗掉微孔中未的结合赭曲霉毒素和酶标记物。加入无色的底物溶液，培养10分钟，所有结合的酶标记物使底物转化成蓝色物质。加入停止液然后读取吸光度值，未知浓度样品与标准吸光度值进行比较，就可以得到样品的赭曲霉毒素浓度。

特异性
Beacon赭曲霉毒素检测试剂盒对于赭曲霉毒素有很强的特异性。标准品设为赭曲霉A， 与赭曲霉B的交叉反应率为9.3%。

试剂及材料
若试剂盒保存在2-8℃，未拆开包装的试剂盒在标识的保质期之前均可放心使用。

1．真空包装，包含干燥剂的8×12的微孔板。
2．5瓶2ml浓度为0，3.0，6.0，18，40ng/ml（ppb）的赭曲霉标准品，（注意：因为谷物样品在萃取过程中1：5稀释，标准品实际上为设定标准浓度的1/5，原始样品的浓度无需换算。）
3．1瓶10ml的酶标记物。
4．1瓶10ml的鼠抗赭曲霉抗体。
5．1瓶14ml的底物溶液
6．1瓶14ml的停止液（注意：1N 盐酸，小心操作！）
7．1瓶50ml的20倍浓缩清洗浓缩液
8．操作说明书

注意事项
1．每种试剂最适用于Beacon 赭曲霉毒素试剂盒。其他生产商的试剂不可替代本试剂盒中的任何试剂，不同批次之间的试剂不可混用。
2．试剂的稀释及污染以及程序中未提及的样品，均会导致结果失真。
3．不可使用过期试剂。
4．开始实验前试剂回温到室温（20-28℃）,避免试剂在室温存放过久（＞24小时）。
5．赭曲霉为极毒物质，将所有丢弃的液体倒入盛有家用漂白粉(不低于10%)的塑料容器中，所有的实验器具必须在30%家用漂白粉溶液中浸泡至少1小时，戴上手套穿上防护服以避免皮肤及黏膜与试剂或样品萃取物接触，如果一旦接触，必须立即用大量水冲洗。
6．停止液为1N 盐酸，避免皮肤及黏膜接触，如果有喷洒，立即清除并用大量水冲洗，

所需材料（不提供）
1．实验室用蒸馏水或去离子水
2．甲醇（色谱级）
3．量筒
4．用于萃取样品及收集萃取液玻璃器皿
5．滤纸，Whatman GF/A及相当者
6．可吸取50ul容量的移液器及一次性吸头
7．可吸取50ul或100ul的八道移液器及一次性吸头
8．洗瓶
9．吸水纸
10．450nm的酶标仪
11．计时器

样品的准备
1．配制适量甲醇+水（7+3），混合并储存于密闭容器中。
2．粉碎好的样品过20目筛并彻底混合，不立即分析的样品需冷冻储存。
3．称取20g样品，量取100ml 70%的甲醇水到一干净的有盖容器中。
4．剧烈震荡3分钟。
5．静置2-3分钟，使样品沉淀。
6．用Whatman GF/A玻璃纤维滤纸过滤15ml萃取液，收集滤液到一干净容器中。

清洗液的准备
1．将清洗浓缩液倒入1L容积的容器中，加入实验室用蒸馏水。
2．将配好的清洗液转移至洗瓶中。

检测程序（注意标准及样品做重复，可以提高检测的准确度及精确度）
1．开始实验前要求试剂及样品萃取液达到室温。
2．取适量的孔条固定在微孔板架上，确定未使用的孔条，与干燥剂一同放入密封袋中保存。
3．加入50ul的酶标记物到微孔中。
4．加入50ul的样品及标准品到相应的孔中，注意使用一次性吸头防止交叉污染
5．加入50ul抗体溶液到微孔中，轻微震荡微孔板。
6．室温下孵育10分钟。
7．倒掉微孔中溶液，微孔中注满清洗液，然后到掉，重复3次，共4次洗板。
8．最后一次清洗完后，倒掉孔中溶液，然后翻转微孔板在吸水纸上拍干。
9．每孔中加入100ul的底物溶液。
10．室温下孵育10分钟。
11．每孔中加入100ul停止液。
12．450nm读吸光度值。

结果判断
1．半定量结果的判定，可根据样品的吸光度值与标准的吸光度值来判定，样品的吸光度值低于某个标准的吸光度值，则说明样品的赭曲霉毒素含量大于此标准的赭曲霉毒素浓度，样品的吸光度值高于某个标准的吸光度值，则说明样品的赭曲霉毒素含量小于此标准的赭曲霉毒素浓度。
2．定量结果判定，需要以标准的吸光度值为X轴，标准浓度的半对数为Y轴绘制曲线图，将标准浓度及吸光度值的点用直线连接，根据样品的吸光度值在Y轴上即可找到相应样品的浓度，如果样品的吸光度值大于最大标准的吸光度值或小于最小样品的吸光度值，即可说明此样品中赭曲霉毒素的含量小于3.0ppb或大于40ppb。
样品的计算

物质吸光度值平均吸光度值 ±SD%RSD%B0
0ppb1.5901.5861.588±0.0030.2100
3ppb1.3101.2701.290±0.0282.281.2
6ppb1.0060.9981.002±0.0060.663.1
18ppb0.5260.5430.534±0.0122.333.7
40ppb0.2770.2720.274±0.0041.417.3