玉米赤霉烯酮检测试剂盒

玉米赤霉烯酮ELISA检测试剂盒
适用
Beacon玉米赤霉烯酮检测试剂盒利用竞争酶联免疫吸附原理定量检测玉米，玉米粉，玉米胚芽粉，玉米麸质粉中的玉米赤霉烯酮。

检测原理
Beacon玉米赤霉烯酮检测试剂盒是基于竞争性酶联免疫吸附检测法。用甲醇/水震荡萃取粉碎样品中的玉米赤霉烯酮,过滤水相萃取物，然后进行免疫学检测。加玉米赤霉烯酮的酶标记物到已加有标准或样品的测试孔中，抗体被加入后反应开始，样品及酶标记物竞争结合连接在微孔上的抗体，10分钟培养后，倒掉孔中的溶液，洗掉微孔中未的结合玉米赤霉烯酮和酶标记物。加入无色的底物溶液，培养5分钟，所有结合的酶标记物使底物转化成蓝色物质。加入停止液然后读取吸光度值，未知浓度样品与标准吸光度值进行比较，就可以得到样品的玉米赤霉烯酮浓度。

特异性
Beacon玉米赤霉烯酮检测试剂盒对于玉米赤霉烯酮及其结构类似物具有的特异性，，以下表格显示了交叉反应率。
CompoundCross-Reactivity
a-zearalenol160%
b-zearalenol16%
a-zearalanol42%
b-zearalanol14%
zearalanone40%

试剂及材料
若试剂盒保存在2-8℃，未拆开包装的试剂盒在标识的保质期之前均可放心使用。
1．真空包装，包含干燥剂的8×12的微孔板。
2．5瓶2ml浓度为0，0.02，0.05,0.25,1.0 ug/ml（ppm）的玉米赤霉烯酮标准品，（注意：因为谷物样品在萃取过程中1：5稀释，标准品实际上为设定标准浓度的1/5，所以原始样品的浓度无需换算。）
3．1瓶8ml的酶标记物。
4．1瓶8ml的兔抗玉米赤霉烯酮抗体。
5．1瓶14ml的底物溶液
6．1瓶14ml的停止液（注意：1N 盐酸，小心操作！）
7．操作说明书

注意事项
1．Beacon Don试剂盒中的试剂须合理使用。其他生产商的试剂不可替代本试剂盒中的任何试剂，不同批次之间的试剂不可混用。
2．操作程序中未提到的样品或者试剂中杂质或被稀释，将会导致结果失真。
3．不可使用过期试剂。
4．开始实验前试剂须置于室温（20-28℃）,避免试剂在室温存放过久（＞24小时）。
5．玉米赤霉烯酮为极毒物质，将所有丢弃的液体倒入盛有家用漂白粉(不低于10%)的塑料容器中，所有的实验器具必须在30%家用漂白粉溶液中浸泡至少1小时，戴上手套穿上防护服以避免皮肤及黏膜与试剂或样品萃取物接触，如果一旦接触，必须立即用大量水冲洗。
6．停止液为1N 盐酸，避免皮肤及黏膜接触，如果有喷洒，立即清除并用大量水冲洗。

所需材料（不提供）
1．实验室用蒸馏水或去离子水
2．ACS级甲醇
3．量筒，100ml或者更大
4．用于萃取样品及收集萃取液玻璃器皿
5．滤纸，Whatman GF/A及相当者
6．可吸取50ul容量的移液器及一次性吸头
7．可吸取50ul或100ul的八道移液器及一次性吸头
8．吸水纸
9．450nm的酶标仪
10．计时器

萃取液的准备
1．量取30ml的蒸馏水或去离子水并转移到带有盖子的干净玻璃容器内。
2．量取70ml的甲醇并加入转移到上述容器内
3．盖进盖子，充分混合后，以备使用，但要防止挥发。

样品的准备
1．粉碎好的样品能过20目筛并在取样前彻底混合，如果样品不能立即分析，应该冷冻储存。
2．称取20g粉碎样品，再量取100ml70%的甲醇/水溶液与样品混合至一有盖容器中。
3．盖好盖剧烈震荡3分钟。
4．静置2-3分钟，使样品沉淀。
5．用Whatman GF/A玻璃纤维滤纸过滤15ml萃取液，收集滤液到一干净容器中。

检测程序（注意对标准及样品做平行测试，可以提高检测的准确度及精确度）
1．开始实验前要求试剂及样品萃取液达到室温。
2．取适量的孔条固定在微孔板架上，确定未使用的孔条，与干燥剂一同放入密封袋中保存。
3．加入50ul的酶标记物到微孔中。
4．加入50ul的样品及标准品到相应的孔中，注意使用一次性吸头防止交叉污染
5．加入50ul抗体溶液到微孔中，轻微震荡微孔板。
6．室温下孵育10分钟。
7．倒掉微孔中溶液，微孔中注满蒸馏水，然后到掉，重复4次，共五次洗板。
8．最后一次清洗完后，倒掉孔中溶液，然后翻转微孔板在吸水纸上拍干。
9．每孔中加入100ul的底物溶液。
10．室温下孵育5分钟。
11．每孔中加入100ul停止液。
12．450nm读吸光度值。

结果判断
1．半定量结果的判定，可根据样品的吸光度值与标准的吸光度值来判定，样品的吸光度值低于某个标准的吸光度值，则说明样品的玉米赤霉烯酮含量大于此标准的浓度，样品的吸光度值高于某个标准的吸光度值，则说明样品的玉米赤霉烯酮含量小于此标准的浓度。
2．定量结果判定，需要以标准的吸光度值为X轴，标准浓度的半对数为Y轴绘制曲线图，将标准点用用直线连接，并且样品吸光度值也位于这条直线上，根据直线上样品的吸光度值在Y轴上即可找到相应样品的浓度，如果样品的吸光度值大于最大标准的吸光度值或小于最小样品的吸光度值，即可说明此样品玉米赤霉烯酮中的含量大于1ppm或小于0.02ppm。