呕吐毒素检测试剂盒(USDA认可产品)

呕吐毒素DON高灵敏度检测试剂盒
适用
Beacon脱氧雪腐镰刀菌烯醇高灵敏度检测试剂盒利用竞争酶联免疫吸附原理定量检测谷物及谷物产品以及麦芽中的呕吐毒素。

检测原理
Beacon脱氧雪腐镰刀菌烯醇高灵敏度检测试剂盒是基于竞争性酶联免疫吸附检测法。用水震荡萃取粉碎样品中的DON,过滤水相萃取物，然后进行免疫学检测。加入呕吐毒素的酶标记物到已加有标准或样品的测试孔中，抗体被加入后反应开始，样品及酶标记物竞争结合连接在微孔上的抗体，10分钟培养后，倒掉孔中的溶液，洗掉微孔中未的结合呕吐毒素和酶标记物。加入无色的底物溶液，培养5分钟，所有结合的酶标记物使底物转化成蓝色物质。加入停止液然后读取吸光度值，未知浓度样品与标准吸光度值进行比较，就可以得到样品的呕吐毒素浓度。

注意事项
1．任何含有DON的溶液都必须作为危险材料进行处理。始终使用手套，防护衣以及适当的方式盛放或处理这样的材料。
2．不可使用过期试剂。
3．试剂盒之间不可交换使用。
4．所有试剂不使用时保存于2-8℃下。
5． DON为极毒物质，将所有丢弃的液体倒入盛有家用漂白粉(不低于10%)的塑料容器中，所有的实验器具必须在30%家用漂白粉溶液中浸泡至少1小时，戴上手套穿上防护服以避免皮肤及黏膜与试剂或样品萃取物接触，如果一旦接触，必须立即用大量水冲洗。
6．试剂盒不能冷冻或暴露于大于37℃的温度下。
7．开始实验前试剂须置于室温（20-28℃），通常在实验开始至少30分钟前拿出试剂盒回温。
8．确认任何阳性样品应当使用认可方法。

试剂及材料

1．包被有抗体的96孔微孔板及96次红色混合微孔板。
2．5瓶4ml浓度为0，0.025，0.050,0.125,0.250 ug/ml（ppm）的DON标准品，（注意：因为谷物样品在萃取过程中1：5稀释，标准品实际上为设定标准浓度的1/5，原始样品的浓度无需换算。）
3．1瓶12mlDON的酶标记物。
4．1瓶12ml的底物溶液
5．1瓶12ml的停止液（注意：1N 盐酸，小心操作！）
6．1瓶50ml的20倍浓缩清洗浓缩液
7．操作说明书

所需材料（不提供）
1．实验室用蒸馏水或去离子水
2．100ml量筒
3．用于萃取样品及收集萃取液玻璃器皿
4．滤纸，Whatman NO.4及相当者
5．可吸取100ul容量的移液器及一次性吸头
6．可吸取100ul的八道移液器及一次性吸头
7．吸水纸
8．450nm的酶标仪
9．计时器

样品的准备
1．粉碎好的样品过20目筛并彻底混合，不能立即分析的样品需冷冻储存。
2．称取20g样品，量取100ml水到一有盖容器中。
3．用手或漩涡混合器剧烈震荡3分钟。
4．静置2-3分钟，使样品沉淀。
5．用Whatman1#玻璃纤维滤纸过滤15ml萃取液，收集滤液到一干净容器中。

清洗液的准备
1．将清洗浓缩液倒入1L容积的容器中，加入实验室用蒸馏水。漩涡混合。
2．将配好的清洗液转移至洗瓶中。

检测程序（注意标准及样品做重复，可以提高检测的准确度及精确度）
1．开始实验前确定所有试剂盒中试剂达到室温。
2．取适量的红色混合孔条以及干净测试孔固定在微孔板架上。确定未使用的孔条，与干燥剂一同放入密封袋中保存。
3．移取100ul的标准溶液及样品到对应的红色混合孔中，每次使用干净的吸头。
4．加入100ul的酶标记物到每个红色混合孔中。
5．用多道移液器，重复吸出并注入混合孔中的物质，使小孔中的物质充分混合。
6．移取100ul的反应混合物到相应的干净测试孔中，丢弃红色混合孔条到废物桶中。
7．加入50ul的样品及标准品到相应的孔中，注意使用一次性吸头防止交叉污染
8．室温下孵育干净孔条10分钟。
9．倒掉微孔中溶液到废物桶中，翻转微孔板并在吸水纸上拍赶所有以液体，用多道移液器加入300ul的清洗液到微孔中，然后到掉，重复4次，共五次洗板。（最后一次拍板后，检查微孔中是否有大的水泡，如果有，用干净吸头挑破，并拍出）
10．每孔中加入100ul的底物溶液。
11．室温下孵育5分钟。
12．每孔中加入100ul停止液。
13．450nm读吸光度值。

结果判断
半定量结果的判定，可根据样品的吸光度值与标准的吸光度值来判定
样品的颜色比某个标准的颜色浅时，则说明样品的DON含量大于此标准的DON浓度
样品的颜色比某个样品的颜色深时，则说明样品的DON含量小于此标准的DON浓度。

定量结果判定，需要以标准的吸光度值为X轴，标准浓度的对数为Y轴绘制曲线图，将标准浓度及吸光度值的点用直线连接，根据样品的吸光度值在Y轴上即可找到相应样品的浓度，如果样品的吸光度值大于最大标准的吸光度值或小于最小样品的吸光度值，即可说明此样品中DON的含量小于0.025ppm或大于0.25ppm。