2,4-D快速检测试剂盒

2,4-D 检测试剂盒
适用
本试剂盒利用免疫学实验方法对水中的2，4-D进行定量检测，检测范围：0.03-0.5 ng/mL （ppb）。 高浓度样品可先进行稀释之后再测定

原理
Beacon公司的2,4-D检测试剂盒由可以和2，4-D及其酶标记物结合的多克隆抗体制成。
样品中的2,4-D 与酶标物竞争结合抗体有限的结合点。抗体固定在测试孔的内侧用于捕获2，4-D。检测过程中：将样品加入测试孔，之后加入2,4-D酶标记物，酶标记物与样品中的2，4 -D竞争包被抗体的结合点，孵育60分钟，洗脱。在每个孔中加入底物溶液，在2,4-D酶标记物的作用下，底物转化为蓝色化合物，一个酶分子可以转化多个底物分子。
每孔中的抗体结合点数目是相同的，且每孔加入的2，4-D酶标物数量也相同，含有低浓度2，4-D的样品可与较多酶标记物分子结合，溶液显深蓝色。相反的，高浓度的样品则 有较少的酶标记物与抗体结合，得到的溶液颜色较浅。

注意：颜色与2，4-D的 浓度成反比
较深的颜色=较低的浓度
较浅的颜色=较高的浓度

特异性
Beacon 2,4-D检测试剂盒专门检测2,4-D 及其相近的化合物。以下表格展示的是相对于2，4-D的交叉反应率
化合物交叉反应率%
2,4-D acid100
2,4-D methyl ester400
2,4-DB100
2,4-D isopropyl ester67
2,4-DB butyl ester53
2,4,5-T9.5
MCPA9.3
Dichlorprop2.7
2,4,5-TP2.2











注意
•不用时将试剂盒储存于4°C -- 8°C
•不可冷冻或将其暴露在高于37°C的环境中
•实验前需将所有的试剂及样品达到室温
•不可使用过期试剂盒
•不可混用不同批次的试剂
•使用确证方法确认阳性阳品


试剂盒组成
1 包被有兔抗抗体的微孔板（12×8条）
1瓶 10 ppm 2,4-D 甲醇溶液.
1瓶 2,4-D -HRP 酶标记物
1底物溶液
1瓶停止液

还需设备:
酶标仪
薄膜
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ï84„û²h,ïûÖ100-1000µL的溶液
用于准备标准液的玻璃试管或小瓶

试验步骤

标准溶液的准备
将 2,4-D 储备液放至室温，用蒸馏水稀释，.稀释液需当天使用。取3个玻璃试管,分别贴上2.0,20,200的标签
1. 制备200ppb 标准液.移取200uL的 10 ppm 储备液至标有200的试管,试管中预先加入 9.8 mL 蒸馏水 ,混匀.
2.制备20ppb 标准液,加1.0mL 的200ppb的溶液至标有20的试管,试管中预先加入 9.0 mL 蒸馏水 ,混匀
3.制备20ppb 标准液,加1.0mL 20ppb 溶液至标有2.0的试管，试管中预先加入 9.0 mL 蒸馏水 ,混匀
4.拧紧装储备液瓶塞以防蒸发损失.

检测步骤
1. 将所有试剂及样品置于室温下
2. 从铝箔袋中拿出要求数量的微孔条，放入干燥剂并重新封好袋子以免微孔条受潮。
3.移取150 µL 标准,制控和样品至对应微孔中,注意每种溶液使用干净的吸头以防交叉污染.
4.加入50 µL 酶标物至每个微孔.
5.快速震荡使孔中溶液混合并敷上薄膜. 或者微孔板可以放在振荡器上震荡孵育
6.孵育60分钟。
7.孵育完后，去掉封口膜将微孔中的溶液倒入水槽,用冷水彻底充满微孔之后倒掉,如此重复四次,共五次洗板。在吸水纸上拍打，尽可能将水拍干
8. 加入100 µL底物溶液至每孔
9 孵育30分钟
10. 按照加底物的顺序每孔加入100 µL 停止液
11. 450nm下读板，如果酶标仪有双波长，可同时测605或650nm双波长。
12.如果酶标仪可以处理数据，可用半对数线性或4参数曲线拟合，如果为手动计算，则可按照以下部分进行

计算结果
1．读板之后，求标准，阴性对照，样品的平均吸光度值并按以下方法计算%B0:
标准，阴性对照，样品吸光度值的平均值
%B0 = -------------------------------------------------
阴性对照的平均吸光值
2．以%B0为Y轴，以2,4-D标准浓度的半对数值为X轴，绘制曲线。
3．通过每个样品的B0%，在图上计算出微囊藻毒素的浓度。
4．如果样品B0%在设定的标准B0%范围之内，就可以得出一个具体的浓度值。如果样品B0%出了范围只能说明样品的浓度大于高浓度的标准或低于低浓度的标准。

样品计算

物质（ppb）吸光度平均吸光度+/- SD%RSD%Bo
阴性对照1.1381.1111.125 +/- 0.00191.7100
2.00.9770.9450.961 +/- 0.0232.385.5
200.6900.6570.674 +/- 0.0233.559.9
2000.2950.2790.287 +/- 0.0113.925.5
质量控制

1.标准品的%B0值应该处于下面的范围之内:

2,4-D 浓度(ppb) %Bo 范围
2.0 84 - 90
20 57 - 63
200 22 - 28