凋亡、半胱胺酸蛋白酶激活抑制剂抗体资料参考
产品名称 凋亡、半胱胺酸蛋白酶激活抑制剂抗体
产品缩写 CD163
蛋 白 名 Scavenger receptor cysteine-rich type 1 protein M130
别 称 M130,MM130,sCD163
免 疫 原 多肽
来 源 兔
特 异 性 抗人
克隆类型 多克隆
应 用 WB免疫印迹
成 分 200μg/ml亲和纯化抗体,0.01M PBS,30%甘油。
保存条件 连续使用时4°C存储,保质期六个月;长期存储时建议分装为10ul以上小包装-20°C存储,并避免反复冻融,保质期一年。
背景资料 The protein encoded by this gene is a member of the scavenger receptor cysteine-rich (SRCR) superfamily, and is exclusively expressed in monocytes and macrophages. It functions as an acute phase-regulated receptor involved in the clearance and endocytosis of hemoglobin/haptoglobin complexes by macrophages, and may thereby protect tissues from free hemoglobin-mediated oxidative damage. This protein may also function as an innate immune sensor for bacteria and inducer of local inflammation. Alternatively spliced transcript variants encoding different isoforms have been described for this gene.
凋亡、半胱胺酸蛋白酶激活抑制剂抗体分类
抗体分类:根据重链恒定区的血清学类型,可将抗体分为IgM,IgG,IgA,IgD,IgE五类,它们的重链分别为mu, gamma, alpha, delta, epsilon链。在上述每一类别中,按重链构造上的变异又可分为几个亚类,例如人的IgG可分为IgG1,IgG2,IgG3,IgG4四个亚类。
轻链分为两种类型,kappa链和lambda链,但每种抗体中只存在一种类型的轻链。
二抗:二抗是在其它宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体,上面通常连有酶或荧光素等标签。由于二抗所具备的优点使得其在免疫学实验中得以应用广泛,如western blot(通过与特异性抗体结合来鉴定蛋白质),ELISA(以耦联有酶的抗体或抗原为标记来检测特异性的蛋白质,尤其是相应的抗原或抗体),免疫组织化学(检测组织中的特异性抗原),免疫细胞化学(通过免疫学方法检测细胞的抗原组成),流式细胞术(通过检测激光所激发荧光来鉴定分离不同类型的细胞)及免疫沉淀(通过抗原与抗体的特异性结合作用来分离相应抗原)。二抗针对某一特定物种(如小鼠)的所有抗体均具有特异性,因而使用标记的二抗可以免去对每一个一抗进行标记,大大节省了时间和费用;此外,一个一抗分子可以同时结合几个二抗分子,从而使信号大大增强,提高了实验灵敏度。
二抗可以耦联有几种不同的标记,可以是酶,荧光素,或生物素。
其他抗体保存方法
带标记的抗体
带标记的抗体一般储存在黑色容器中或者用锡箔纸盖住。
酶标记抗体
碱性磷酸酶和其他酶结合物对于冷冻特别敏感,一般应在4°C短期存储。
标记抗体长期保存最好是在终浓度为50%的甘油或乙二醇中于-20°C保存。虽然某些酶结合物可在无保护剂的情况下于-20°C储存,但必须分装,以防止反复冻融。
荧光标记抗体
荧光遇光容易分解,荧光标记的试剂(不只是抗体)必须避光保存,其应该存放在4°C、避免让其凝固。
凋亡、半胱胺酸蛋白酶激活抑制剂抗体参考效价选择
Flow Cytometry:1:40-80
Western blotting:1:100-400
Immunocytochemistry in fixed cells:1:50-200
enzyme-linked immuno sorbent assay:1:2000
Immunohistochemistry in paraffin section:1:50-200
如何选择二抗
通常情况下,某一特定的实验中可能同时有几种二抗可供选择,如何能选择到最适合该实验的二抗,需要综合以下几个方面进行考虑:
一抗的物种来源
一抗是在什么物种来源的,相应的二抗也要是抗该物种的抗体。例如,如果一抗是在小鼠体内制备的,那么你就应当选择抗小鼠的二抗,如果一抗是在兔体内制备的,那么二抗就应当是抗兔的抗体。至于二抗本身是在什么动物中制备的对二抗的质量并无明显的影响。
一抗是属于哪个类或亚类
二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白,因此相应的二抗就是抗IgG抗体。
单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品列表中列出,如果你的一抗是小鼠IgM,那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM,或是抗小鼠IgG抗体。
如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类(IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3),那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合,或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗,例如,如果你的一抗是小鼠IgG1,那么你可以选择抗IgG1的二抗,此种抗体在双标记实验中尤其适合。
如果你不知道一抗是哪一类别或亚类,那么抗小鼠IgG是一个不错的选择,因为此种抗体可以识别大多数类型的IgG免疫球蛋白。
如何分装凋亡、半胱胺酸蛋白酶激活抑制剂抗体
请根据一次实验的常用量进行分装。每等份不应少于 10 µl;每等份的量越少,抗体储液浓度受蒸发和管壁吸附的影响越大。
第一步:选择抗体。
三种二抗抗体:Whole IgG,F(ab&;rsquo;)2片段,Fab片段。
Whole IgG抗体适用于多数情况,是性价比最高的。Whole IgG是完整的抗体分子,有一个Fc部分和两个与抗原结合的Fab部分 (Figure 1, Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc网站)。
F(ab&;rsquo;)2片段抗体是胃蛋白酶消化IgG除去Fc部分,剩下靠二硫键连接的结合抗原的两个Fab部分。F(ab&;rsquo;)2片段抗体用在避免抗体与Protain A 或G结合,或者与有Fc受体的活细胞结合。如果一抗是完整的抗体分子,不管二抗是哪种形式都可能结合Fc受体。
Fab片段抗体是用木瓜蛋白酶消化IgG后得到的。这些抗体只含有一个Fab结合位点。它们用来封闭内源性的免疫球蛋白,或者在使用相同物种来源的一抗多标记的实验中封闭暴露的免疫球蛋白。
第二步:一抗的物种来源。
为了正确的选择二抗,必须知道一抗的物种来源。如果一抗是小鼠来源的,就找&;ldquo;anti-mouse&;rdquo;。
第三步:选择二抗的物种来源。
第四步:选择二抗的特异性。
因为不同物种来源的免疫球蛋白含有相似的结构,抗一个物种的抗体可能与其他物种发生交叉反应,除非事先特殊处理过(如标有&;ldquo;min X Hu, Bov&;hellip;Sr Prot&;rdquo; - minimal cross-reactivity to human and bovine serum proteins) ), 经过用圆括号中的物种 (human, bovine) 的血清蛋白的吸附处理来降低交叉反应)。在选择二抗时,只有在来自两个很相近的物种的一抗都存在而需要检测其中一种时,才使用针对其中一种特殊吸附处理过的抗体。这样的抗体可能不能和所有亚型的IgG都很好的反应。比如,在含有内源性免疫球蛋白的大鼠的组织样本中,使用针对大鼠吸附处理过的anti-mouse IgG来检测小鼠的一抗,或者在多标记实验中使用了大鼠的一抗时。当不含有大鼠免疫球蛋白时,最好采用没有针对大鼠IgG处理过的anti-mouse二抗来检测小鼠的一抗。牛血清白蛋白(BSA)和奶粉中可能含有牛IgG。直接针对牛,山羊,马和绵羊的二抗会跟牛IgG反应。因此,使用BSA或者奶粉来封闭或者稀释这些抗体可能导致背景染色明显增加,以及抗体效价的降低。这时,推荐使用5%的二抗来源物种的正常血清来封闭。
Anti-IgG (H+L)这类抗体和IgG分子的重链和轻链[比如Fc和F(ab&;rsquo;)2/Fab部分]都可以反应。也可以和其他的免疫球蛋白家族(比如IgM和IgA)反应,因为所有的免疫球蛋白都有相同的轻链(&;kappa;链或者&;lambda;链)。Anti-IgG (H+L) 比只抗片段的抗体识别更多的抗原表位。
Anti-IgG,Fc fragment specific这类抗体和IgG重链的Fc部分反应。它们通过了ELISA检测,和(或)针对Fab片段吸附的测试。某些情况下,需要额外检测和处理来降低和IgM或IgA的交叉反应,会被描述为&;ldquo;Anti-IgG, Fc&;gamma;fragment specific&;rdquo;。注意:不是所有anti-IgG, Fc抗体和所有亚型的IgG反应能力一致。要找和四种IgG亚类反应能力差不多的anti-mouse IgG, Fc&;gamma;抗体的话,应当选Goat Anti-Mouse IgG (subclasses 1+2a+2b+3), Fc&;gamma;fragment specific (min X Hu,Bov,Rb Sr Prot)。
Anti-IgG,Fc&;gamma; Subclass specific抗体分别和不同的小鼠IgG亚型重链的Fc部分反应。这类抗体经过ELISA和/或针对Fab片段、IgM和其他小鼠IgG亚型的吸附测试。
Anti-IgG,F(ab&;rsquo;)2 fragment specific和IgG的F(ab&;rsquo;)2/Fab部分反应。这类抗体经过了ELISA和/或Fc片段的吸附检测。因为和轻链反应,它们同时也和具有相同轻链的其他种类的免疫球蛋白反应(如IgM和IgA)。
(min X&;hellip;Sr Prot)这类抗体经过了检测,以及针对IgG和圆括号中的物种的血清蛋白的吸附处理。当其他物种免疫球蛋白的出现可能导致交叉反应时,推荐使用这类抗体。但是,当要选择经过针对相近物种吸附处理的抗体时,要特别注意,因为它们能识别的表位数量大大减小了,可能识别单抗的能力很弱。这种情况的例子有Anti-Mouse IgG (min X Rat,&;hellip;.Sr Prot), Anti-Rat IgG (min X Mouse, &;hellip;Sr Prot), 和 Anti-Ramenian Hamster IgG (min X Mouse, Rat, &;hellip;Sr Prot)。
ML (Multiple Labeling多标记实验): 有些抗体标明了ML,来强调它们除了可以用于单标,还可用于多标记实验。
第五步:选择需要的探针。
第六步:选择的抗体的规格、价钱和目录号。