兔热休克蛋白90(HSP-90)ELISA试剂盒

兔热休克蛋白90(HSP-90)ELISA试剂盒操作步骤

一、实验目的

本实验旨在介绍兔热休克蛋白90（HSP-90）ELISA试剂盒的操作步骤，以便研究人员能够准确、快速地检测兔血清或组织样本中的HSP-90浓度。

二、实验原理

ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫分析方法，通过酶标记的抗体或抗原与固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合反应，再加入酶底物，根据产生的颜色反应进行定量或定性分析。本实验采用间接ELISA方法，即用特异性抗体包被固相载体，再加入标准品、待测样本和酶标记的二抗，后加入底物显色，根据颜色深浅判断待测样本中HSP-90的浓度。

三、操作步骤

1. 准备工作
（1）提准备好所有试剂和器材，包括ELISA试剂盒、标准品、待测样本、酶标板、酶标仪、吸管、酶标板架等。
（2）按照试剂盒说明书配置好洗涤液、底物液和终止液。

2. 包被抗体
将特异性抗体按照说明书要求的浓度稀释后，加入酶标板孔中，加入等体积的空白血清或PBS作为阴性对照，4℃孵育过夜。

3. 洗涤和封闭
次日，用洗涤液洗涤3次，每次3分钟。然后用封闭液封闭60分钟，期间轻摇酶标板3次。封闭后再次用洗涤液洗涤3次。

4. 加标准品和待测样本
根据说明书要求，将标准品和待测样本加入相应的酶标板孔中，加入等体积的PBS作为阴性对照。37℃孵育1小时。

5. 洗涤和加酶标二抗
洗涤3次后，加入酶标二抗，37℃孵育1小时。然后再次洗涤3次。

6. 底物显色
加入底物液和终止液，显色15分钟。在酶标仪上读取吸光度（OD）值。

7. 计算结果
根据标准品浓度和OD值绘制标准曲线，然后根据待测样本的OD值计算其浓度。

四、注意事项

1. 在操作过程中要注意防止污染，确保试剂和样本不被污染。
2. 严格按照试剂盒说明书进行操作，不要随意更改实验步骤和条件。
3. 对于不明确的样本或异常结果，应进行重复实验或进一步验证。
4. 实验过程中要注意安全，避免接触有毒物质和危险品。
5. 实验结束后要及时清理实验场地和废弃物，保持实验室整洁。
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