1. 包被抗原:用包被液将抗原作适当稀释, 一般为1~10μg /孔,每孔加200μl,37℃温育1小时后,4℃冰箱放置16~18小时。
2. 洗涤:倒尽板孔中液体,加满洗涤液,静放三分钟,反复三次,最后将反应板倒置在吸水纸上,使孔中洗涤液流尽。
3. 加封闭液200μl,37℃放置一小时。
4. 洗涤同2。
5. 加被检血清:用稀释液将被检血清作几种稀释,,每孔200μl。同时作稀释液对照。37℃放置2小时。
6. 洗涤同2。
7. 加辣根过氧化物酶羊抗兔IgG, 每孔200μl, 放置37℃ 1小时。
8. 洗涤同2。
9. 加底物:邻苯二胺溶液加200ml,室温暗处10--15分钟。
10. 加终止液:每孔50μl。
11. 观察结果:用酶联免疫检测仪记录490nm读数。
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