人粒细胞趋化蛋白2(GCP-2)酶联免疫试剂盒 注意事项：
1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强
光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。
2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成
任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！
3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的
“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间好控制在
10分钟内。推荐设置复孔。
4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标
板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。
5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸
水。在读数要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。
6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较
小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶
盖的液体沉积到管底。取用，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗
体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请
精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection
Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释
过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次
用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。
7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很
明显，请提加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。
8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，好使用微量振荡器(使用低频率)，如无微量
振荡器，可在反应手工轻轻敲击酶标板框混匀。
10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品
时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。
11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外）
12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！
人粒细胞趋化蛋白2(GCP-2)酶联免疫试剂盒酶联免疫吸附剂测定可用于测定抗原，也可用于测定抗体。
在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，②酶标记的抗原或抗体，③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
48μmol/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液
24μmol/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液
12μmol/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
6μmol/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液
3μmol/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，
然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10 分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。
人粒细胞趋化蛋白2(GCP-2)酶联免疫试剂盒
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
3. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
4. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
5. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
6. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
7. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
组成
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（96μmol/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张
6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个
人粒细胞趋化蛋白2(GCP-2)酶联免疫试剂盒
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Validated Application: Prevention of Cell Culture Contamination
Agent: Streptomycin, Penicillin
Form: Liquid
Reagent Type: Antibiotic
Concentrated: 100 X
Product Size: 100 mL
Shipping Condition: Dry Ice
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