Spinner盐粉剂(1×,无酚红)厂家
适用的样本类型 血清、血浆、细胞上清液、胸腹水、脑脊液、处理后的固体样本等
检测方法
双抗体夹心法
用途
科学研究
试剂盒性能
有效期：6个月 保存条件：2-8℃，避光防潮保存
准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值，大于等于 0.9600
特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应
重复性：板内、板间变异系数均小于 15%Spinner盐粉剂(1×,无酚红)厂家
检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被相关指标的抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的相关指标呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解 冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
操作注意事项
1. 试剂盒保存在 2-8℃，使用室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 浓度为 0 的标准品可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍，终结果乘以5才是样本终浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用充分摇匀。
6. 若中英文说明书有误，请以中文说明书为准。
7. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。
8. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
洗板方法
1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5次。
2.自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。
试剂盒组成
名称 96 孔配置 48 孔配置 备注
微孔酶标板 12 孔×8 条 12 孔×4 条 无
标准品 0.5mL 0.5mL 按说明书进行稀释
标准品稀释液 6mL 3mL 按说明书进行稀释
样本稀释液 6mL 3mL 按说明书进行稀释
检测抗体-HRP 6mL 3mL 无
20×洗涤缓冲液 20mL 20mL 按说明书进行稀释
底物 A 6mL 3mL 无
底物 B 6mL 3mL 无
终止液 6mL 3mL 无
封板膜 2 张 2 张 无
说明书 1 份 1 份 无
自封袋 1 个 1 个 无
操作步骤
1.从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。
2. 设置标准品孔、样本孔和空白孔，空白孔什么都不加；标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL；
3. 待测样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL；
4. 随后标准品孔和样本孔中（空白孔不加）加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 50μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗 板 5 次（也可用洗板机洗板）。
6. 所有孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
7. 所有孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。
结果判断
绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
免责声明
试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或生物体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担， 本公司概不负责。
严格按照说明书操作，不同批号不可交换使用，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
上海笃玛生物科技有限公司是一家国内合资集科研和生产为一体的专业化生物公司。专业提供各类进口品牌，研发生产ELISA试剂盒、细胞株、抗体、耗材、培养基等产品，并提供实验外包，技术指导，操作指导，代做实验，代做课题等技术服务。公司拥有世界一流水平的研发团队、领先的技术、尖端的研发平台及现代化的生产基地，生产各类科研用的产品。 我们由衷的感谢海内外科学家、感谢国内外广大科研工作者、学者予以我们鼎力的支持和理解，我们将在未来的工作中，百尺竿头，发挥优势，勇于开拓、自主创新、敢为人先、锲而不舍，在生命科学的道路上，不断进取，奋发努力，瞄准国际生命科学的前沿，不断创新研发新产品。为科研工作提供更好、更人性化的服务。
