Hep 3B2.1-7 [Hep 3B; Hep-3B; Hep3B]人肝癌细胞 

【Hep 3B2.1-7 [Hep 3B; Hep-3B; Hep3B]人肝癌细胞 】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【Hep 3B2.1-7 [Hep 3B; Hep-3B; Hep3B]人肝癌细胞 】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【Hep 3B2.1-7 [Hep 3B; Hep-3B; Hep3B]人肝癌细胞 】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【Hep 3B2.1-7 [Hep 3B; Hep-3B; Hep3B]人肝癌细胞 】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

206143QIAGEN Multiplex PCR Kit (100)"For 100 x 50ul multiplex PCR reactions: 

2x QIAGEN Multiplex PCR Master Mix (HotStarTaq® DNA Polymerase,Multiplex PCR Buffer, dNTP Mix) (providing a final concentration of 3 mM MgCl2, 3 x 0.85 ml), 

5x Q-Solution (1 x 2.0 ml), 

distilled water (2 x 1.7 ml)"CNY

132107EasyXtal 15-well DG-Tool (100)CNY

337849qBiomarker SYBR ROX FAST Mastermix 25 mlCNY

762635QIAsymphony PAXgene Blood RNA Kit (96)CNY

204001Rotor-Gene Sybr Green PCR Demo Kit (80)CNY

203446HotStarTaq Master Mix Kit (2500)"1x25 ml HotStarTaq Master Mix (providing a final concentration of 1.5mM MgCl2, ａnd 200 uM each dNTP), containing 2500 units HotStarTaq DNA Polymerase total, ａnd 2 x 20 ml RNase-free Water

- 

Please note 2005 Product guide is incorrect - this product is NOT 30vials of 0.85ml"CNY

203207HotStarTaq DNA Polymerase (5000)"1 x 5000 units of HotStarTaq DNA Polymerase

10X PCR Buffer (contains 15 mM MgCl2)

5X Q-Solution

25 mM MgCl2"CNY

203205HotStarTaq DNA Polymerase (1000)"4 x 250 units HotStarTaq DNA Polymerase, 10x PCR Buffer,* 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2

FOR MORE INFO ABOUT THIS PRODUCT PLEASE SEE HOTSTARTAQ DNA POLYMERASE 250 UNITS (203203)"CNY

202602HotStar HiFidelity Polymerase Kit (100)100 units HotStar HiFidelity DNA Polymerase, 5x PCR Buffer containing dNTPs, 5x Q-Solution, 25 mM MgSO4, RNase free waterCNY

159932Generation Capture Plate Kit (12)CNY

159330Harris UNI-CORE 1.25 mm Punch Kit (4)CNY

159155QIAsafe DNA Blood Rehydration Set (100)CNY

158845Gentra Puregene Buccal Cell Kit (100)CNY

158667Gentra Puregene Tissue Kit (4 g)CNY

34610RGS·His Antibody (100 µg)100 ug mouse anti-RGS(H)4 (lyophilized, with BSA, for 1000 ml working solution)CNY

33903pQE-TriSystem Vector DNA25 ug pQE-TriSystem Vector DNACNY

32723EasyXpress Linear Template Kit Plus (20)CNY

32502EasyXpress Protein Synthesis Kit (20)For 20 x 50 ul reactions: E. coli extract, reaction buffer, RNase-free water, ａnd positive-control DNACNY

30760Ni-NTA Superflow Cartridges (1x5 ml)CNY

30410Ni-NTA Superflow (25 ml)25 ml nickel-charged resin (max. pressure: 140 psi)CNY

9021097Sensor, Proximity SME-8M, DCUCNY

9021218# LED, 4 µA (12), QXCNY

9021351Piston pin, connecting rod, TLyser lTCNY

28206MinElute Reaction Cleanup Kit (250)250 MinElute Spin Columns, Buffers, Collection Tubes (2 ml)CNY

9243307HC2 Systems Training – On siteHC2 On site, 3 day course trains users (max. 1 participant) on the HC2 system (manual or automated) ａnd includes trainer travel, time ａnd materials.CNY

101.572-12U#HLA-B*5701 excl. Taq (12)CNY

6000-3002#Washer Alignment Block, PTW1CNY

9011231Tischplatte Plato 3101 SI Immucor (9194)CNY

9011207High speed shaker, autom. plate, BR8000CNY

9011002Base,rotor motor,buff.track,BR8000 v1.00CNY