重组人ErbB3片段

【重组人ErbB3片段】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【重组人ErbB3片段】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【重组人ErbB3片段】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【重组人ErbB3片段】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9018417Cover, front, blue window, QXCNY

9018403ZLV, Detect barrel (1), QXCNY

290103mericon Shigella spp Kit (24)CNY

9015392Clamp, rubber, adapter plate, HS shaker,CNY

9001793QIAcube HT/QIAxtractor, systemCNY

9012330Syringe Pump outlet tubingCNY

9012324Tubing set, perist. pump, 8x15 cmCNY

1070203Blind Plug (1)CNY

133078NeXtalStock PEG 2,000 DME (200)CNY

9015374Motor, M/D, M96CNY

133155NeXtalStock BIS-TRIS Propane pH7.5 (100)CNY

204645QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit (1000)CNY

204543QuantiTect Multiplex PCR Kit (200)CNY

133057NeXtalStock Lithium nitrate (200)CNY

133056NeXtalStock Lithium chloride  (200)CNY

870211therascreen BRAF RGQ PCR kit (24) CECNY

870201BRAF RGQ PCR Kit (24)CNY

805963REPLI-g Service,  HT (100 µg)CNY

800467Setup of glycerol culturesCNY

290015mericon Salmonella spp Kit (96)CNY

9015352Board, IPS, M48CNY

9015351Board, motor driver, M48CNY

9018393Key, User, blue, QIAxcelCNY

9001667Rotor-Gene Q 6plex (w/o PC) SystemRotor-Gene Q 6plex (w/o PC) System includes the Rotor-Gene system ａnd installation. The Installation ａnd Introductory Training is an on-site service, conducted by a QIAGEN Service Specialist. It covers the handling of the Rotorgene-Q systems hardware ａnd trains the user on operation of the Rotorgene software. All travel ａnd labor cost included for Installation ａnd service documented on a GMP/GLP-compliant Field Service document.CNY

951034EZ1 DNA Blood 200 µl Kit (48)48 Reagent Cartridges (Blood 200 ul), 50 Disposable Tip Holders, 50 Disposable Filter-Tips, 50 Sample Tubes (2.0 ml), 50 Elution Tubes (1.5 ml)CNY

950911Capture Plate, DX (5)CNY

37623Qproteome FFPE Tissue Kit (20)CNY

37541Qproteome Total Glycoprotein KitCNY

158388Gentra Puregene Cell Kit (6.7 x 109)CNY

150025REPLI-g Mini Kit (100)DNA Polymerase, Buffers, ａnd Reagents for 100 x 50 µl whole genome amplification reactions (typical yield 10 µg per reaction)CNY

1011198Ni-NTA HisSorb 384 Plates (100)CNY