泰乐菌素检测试剂盒

高回收率(75%-105%)，多种样品的低成本提取方法；高重复性；检测过程只需要不到1.5小时；五合一处理方法更省时、经济、环保。

产品概述

泰乐菌素检测试剂盒酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，含有泰乐菌素检测试剂盒(SEM)的抗体已经包被于微孔板上。药物分析时，样品同SEM-HRP共同被添加到板孔中。如果样品中含有SEM，会竞争SEM抗体，抑制SEM-HRP与板上包被的抗体结合。加入底物后，产物的颜色强弱与样品中SEM的浓度成反比。

 试剂盒组成

已包被的酶标板（可拆式）                                            12×8 孔

标准液（0，0.025，0.1，0.4，1.6，6.4ppb）                              6×2.0mL

回收用10ppb(Spiking)——可选                                        1×0.8ml

HRP酶标抗原(HRP-Conjugated)                                         1×6mL

10×样品提取液(Sample Extraction Buffer)                             1×25mL

20×浓缩洗液(Wash Solution)                                          1×30mL

终止液(Stop Buffer)                                                  1×20mL

TMB底物(TMB Substrate)                                               1×10mL

50mM 2-硝基苯甲醛(2-Nitrobenzaldehyde)                               1×1.8mL

本试剂盒应当在2-8℃的温度下储存，有效期为一年。如果超过3个月不使用试剂盒，

请将SEM-HRP酶标抗原放置-20℃或者冰冻保存。

检测试剂盒以外需要提供的设备或材料

1)      酶标仪(450 nm)

2)      恒温培养箱

3)      匀浆器

4)      蒸干器

5)      漩涡振荡器

6)      移液枪(50，100mL，1mL各一支)

7)      多道移液器（50-300mL）

8)      乙酸乙酯

9)      0.1M K₂HPO₄

10) 正己烷

注意事项

实验前请阅读以下文字，以保证获得最佳实验效果。

1)      标准品中含有泰乐菌素检测试剂盒，请小心使用。

2)      不要使用过期的试剂盒。

3)      不同批次的试剂盒不要混用，抗体和微孔板具有盒与批次的特异性。

4)      尽量保持室温20-25℃，避免在通风口操作防止温度过低，过热和/或者蒸发。同样的，不要在阳光直射下实验，防止过热及蒸发。在孵育期间，如果工作台温度过低，应该铺垫若干纸巾或者其他物料。

5)      水质量很重要，确保使用蒸馏或者去离子水。

6)      加入样品或者试剂到空的微孔板时，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接触。

7)      孵育时间的计算越规范越好，保持添加标准品的一致性，先添加标准品后添加样品。

8)      从低浓度到高浓度地添加标准品，降低影响标准品曲线质量的风险。

9)      将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中，冷藏保存。

样品的准备【泰乐菌素检测试剂盒】

确保样品的正确保存，一般来说，样品在2-4只能保存1-2天，如果要保存更长时间，就要保存在-20冷冻保存，在用之前需要将冷冻的样品在室温下或冰箱内解冻。

1×样品提取液

按1：9的比例配制样品提取浓缩液和双蒸馏水。

1）饲料（用于检测添加到饲料中的鱼粉、虾粉或动物组织的SEM）

（1）    取0.5g匀质样品，加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL蒸馏水，0.5mL 1M HCl和20 µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，涡旋振荡1min；

（2）    50°C恒温培养3小时，在培养期间，每1h振荡5秒；

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，最大转速涡旋震荡1min；

（4）    室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL乙酸乙酯上清液（含0.25g初始样品）到另一试管（避免触及下层水相！如果

移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60-70 °C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品提取液，最大转速涡旋振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：4.0

2）鱼/虾/肉（牛肉/鸡肉/猪肉）：可用于五合一前处理方法

（1）    称取1g匀浆样品加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL蒸馏水，0.5mL 1M HCl和20µL50 mM 2-硝基苯甲醛，涡旋震荡30秒；

（2）    50°C恒温培养3h，培养期间，每1h振荡5秒；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，涡旋震荡振荡30s；

（4）    室温下（20-25℃）4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品)到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），如果出现乳化现象，上清液不足3mL，请85℃水浴3分钟。在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；（注：肝脏组织富含脂肪、色素等，为防止乳化现象，建议选用4mL正己烷溶解，涡旋震荡30秒后，再进行下一步操作）

（7）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡1分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

注意：为了避免过高的背景值，建议用空白样品做平行，从取3ml乙酸乙酯上清旋转蒸发开始。

稀释倍数：2.0

3）鸡蛋【泰乐菌素检测试剂盒】

（1）    称取1g鸡蛋样品加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL蒸馏水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡30秒；

（2）    50°C恒温培养3小时，在培养期间，每1h振荡5秒；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，涡旋震荡振荡30s；

（4）    室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60-70℃减压蒸馏或60-70℃氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品抽提工作液体，剧烈振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：2.0

注意：为了避免过高的背景值，建议用空白样品做平行，从取3ml乙酸乙酯上清旋转蒸发开始。

4）蜂蜜

（1）    称取1g蜂蜜加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（2）    50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，最大转速振荡1min；

（4）    室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：2.0

5）牛奶

（1）    对于含脂牛奶，取待测牛奶样品3ml室温4000g，5min。除去上层脂肪层。（对于脱脂奶粉，次步略）

（2）    取1ml样品，加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（3）    50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，最大转速振荡1min；室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

     稀释倍数：2.0

6）血清【泰乐菌素检测试剂盒】

（1）        称取1g血清加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（2）        50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）        加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，最大转速振荡1min；

（4）        室温下4000g离心10分钟；

（5）        取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移

取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）        用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）        加入1mL1×样品提取液，剧烈

（8）        振荡2分钟；

（9）        室温下4000g离心10分钟；

（10）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

     稀释倍数：2.0

7）尿样

（1）    取3ml尿样，4000g离心5min。

（2）    离心后称取1ml，加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（3）    50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，最大转速振荡1min；

（5）    室温下4000g离心10分钟；

（6）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（7）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（8）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡2分钟；

（9）    室温下4000g离心10分钟；

（10）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：2.0

检测步骤

试剂的准备

注意：试剂在使用之前要在室温下解冻1-2小时，确定在使用前阅读过注意事项。准备适量的检测用试剂，所有的试剂摇匀后使用。准备足够所有小管所需的用量，不能将试剂倒回原来的瓶子中，处理试剂时建议用废弃的瓶子以降低污染的风险。

1x洗液的制备

1体积的20x洗液同19体积的蒸馏水混合

检测

\以下为计算份量的表格，用户可根据自己的需要来确定需要配置多少试剂。

（1）    加入100mL的标准品于所设定的孔中；

（2）    加入100mL的样品于所设定的孔中

（3）    在每孔中加入50mL 1×SEM-HRP，轻敲微孔板边缘混匀1分钟；

（4）    室温（22.5±2.5）°C避光孵育30分钟；

（5）    洗板3次，每次应该加入250mL 1×洗液，最后一次使板尽量甩干并在吸水纸上吸干；

（6）    每孔加入100mL的TMB底物；

（7）    在室温（22.5±2.5）°C避光孵育20分钟后，每孔加入100mL的终止液终止反应;

（8）    在450nm或450/650nm下读OD值 (读数前，用吸水纸将板底部的指痕和水分擦去，避免影响读数)。

10．结果计算【泰乐菌素检测试剂盒】

（1）    分别计算标准、质控和样品的平均吸光度值和相对吸光度值。

相对吸光度值 (%) = (标准或样品吸光度值/零标准吸光度值) ´ 100

（2）    以相对吸光度值为纵坐标，标准浓度为横坐标建立标准曲线。

（3）    从标准曲线上读取质控和样品的浓度值。

（4）    样品检测下限计算方法如下：

样品检测下限 = (0.025ng/g) ´ (稀释倍数)

样品定量下限 = (0.1ng/g) ´ (稀释倍数)

例如，肉类样品的稀释倍数是2.0,那么肉类样品的检测下限是0.05ppb,定量检测下限是0.2ppb。

1027286  AllStars Neg. siRNA AF 555 (5 nmol)                  CNY                             

9233457  Flange, pressure sensor            CNY                             

9019231  Motor - X/Y, PyroQ24                 CNY                             

9019224  Pump - Pressure, PyroQ24                 CNY                             

9019219  Gripper arm kit, PyroQ96MD           CNY                             

9019210  Barcode reader, PyroQ96MD           CNY                             

9011927  Tip-disposal unit, v1.02             CNY                              【泰乐菌素检测试剂盒】

1066849  PG AIV-H7 RT-PCR Assay (48) LE Z             CNY                             

1066853  PG AIV-H9 RT-PCR Assay (48) LE Z             CNY                             

9232908  Card, dispenser unit, BR8000           CNY                             

1061066  Sample Preparation Reagents, 30ml Z             CNY                             

1061122  HBV PCR REAGENT VI               CNY                             

9016585  Plate Stacker Ambient Temp, RCS1          CNY                             

9016567  Z-Rack, RCS1             CNY                             

9016534  Transportation box , Twister I           CNY                             

9016532  Transportation box 3, LiquiChip                 CNY                             

9016531  Transportation box 2, LiquiChip                 CNY                             

9016149  #App. Package, M48, Gene Expression            CNY                            

9011895  Tubing, teflon, M6, 3 x 0.5 mm, 2.5 m              CNY                             

9016514  Rect. Bucket Set (4), sealable with cap            CNY                             

9016270  Maintenance Kit, Multiflow BR MDx V2          CNY                             

9016265  MJR Microseal Pad for ALP 2296  MSP-1002          Package of 10  CNY                             

9019177  Motor - Plate lock, PyroQ96MD                CNY                              【泰乐菌素检测试剂盒】

9011866  Shaker adapter 8000, microplate    Adapter for accommodating four 96-well plates (or other labware with the same base dimensions) on the BioRobot 8000 4-plate high-speed shaker system; not for use with the robotic handling system    CNY                            

9011839  Tubing Set, Pipet, Immucor               CNY                             

9011833  Dilutor unit, BR8000                  CNY                             

9019136  Cable - X/Y, PyroQ96ID              CNY                             

9019121  PCB 1 - Connection, PyroQ96ID                 CNY                             

9019064  PyroMark Vac Prep Tool, PyroQ24VW               CNY                             

9019018  Board, motor driver, EZ1xl                CNY                             

9019001  Door, metal frame, EZ1xl                  CNY                             

9018944  Adapter, Millipore Extraction Plate                   CNY                             

9016001  Magnet head for medium 96 plate, BS96                 CNY                             

QY-x17      786-O [786-0]肾透明细胞腺癌细胞      CRL-1932                                               

QY-x18      K-562慢性髓原白血病细胞  CCL-243                                        

QY-x19      K-562慢性髓原白血病细胞  CCL-243                                        

QY-x20      Hce-8693盲肠腺癌细胞未分化                                                  

QY-x21      HEL299红白细胞白血病细胞        CCL-137                                        

QY-x22      CW-2结肠腺癌细胞                                                      

QY-x23      A-375 [A375]恶性黑色素瘤细胞    CRL-1619                                               

QY-x24      COLO-320结肠腺癌细胞                                                      

QY-x25      A172胶质母细胞瘤细胞        CRL-1620                                               

QY-x26      SW480 [SW-480]结肠癌细胞  CCL-228                                        

QY-x27      SHG-44胶质瘤细胞                                                      

QY-x28      Caco-2结肠腺癌细胞     HTB-37                                         

QY-x29      Caco-2结肠腺癌细胞     HTB-37                                         

QY-x30      U251胶质瘤细胞                                                  【泰乐菌素检测试剂盒】

QY-x31      LS 174T结肠腺癌细胞   CL-188                                          

QY-x32      SK-N-MC神经上皮瘤细胞      HTB-10                                         

QY-x33      SK-N-MC神经上皮瘤细胞     HTB-10                                         

QY-x34      BxPC-3原位胰腺腺癌细胞   CRL-1687                                               

QY-x35      BxPC-3原位胰腺腺癌细胞     CRL-1687                                               

QY-x36      KP-N-NS肾上腺神经母细胞瘤细胞脑转移                                                

QY-x37      AsPC-1转移胰腺腺癌细胞     CRL-1682                                               

QY-x38      AsPC-1转移胰腺腺癌细胞     CRL-1682                                               

QY-x39      U-2 OS骨肉瘤细胞          HTB-96                                         

QY-x40      U-2 OS骨肉瘤细胞          HTB-96                                         

QY-x41      GBC-SD胆囊癌细胞                                                      

QY-x42      RD恶性胚胎横纹肌瘤细胞   CCL-136                                        

QY-x43      RD恶性胚胎横纹肌瘤细胞   CCL-136                                        

QY-x44      HCCC-9810胆管细胞型肝癌细胞                                               

QY-x45      A-673横纹肌瘤细胞       CRL-1598                                               

QY-x46      SMMC-7721肝癌细胞                                                   【泰乐菌素检测试剂盒】

QY-x47      SMC-1胸膜细胞瘤                                                        

QY-x48      QGY-7703肝癌细胞                                                      

QY-x49      NCI-H446 [H446]小细胞肺癌细胞         HTB-171