磺胺类试纸条

高回收率(75%-105%)，多种样品的低成本提取方法；高重复性；检测过程只需要不到1.5小时；五合一处理方法更省时、经济、环保。

产品概述

磺胺类试纸条酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，含有磺胺类试纸条(SEM)的抗体已经包被于微孔板上。药物分析时，样品同SEM-HRP共同被添加到板孔中。如果样品中含有SEM，会竞争SEM抗体，抑制SEM-HRP与板上包被的抗体结合。加入底物后，产物的颜色强弱与样品中SEM的浓度成反比。

 试剂盒组成

已包被的酶标板（可拆式）                                            12×8 孔

标准液（0，0.025，0.1，0.4，1.6，6.4ppb）                              6×2.0mL

回收用10ppb(Spiking)——可选                                        1×0.8ml

HRP酶标抗原(HRP-Conjugated)                                         1×6mL

10×样品提取液(Sample Extraction Buffer)                             1×25mL

20×浓缩洗液(Wash Solution)                                          1×30mL

终止液(Stop Buffer)                                                  1×20mL

TMB底物(TMB Substrate)                                               1×10mL

50mM 2-硝基苯甲醛(2-Nitrobenzaldehyde)                               1×1.8mL

本试剂盒应当在2-8℃的温度下储存，有效期为一年。如果超过3个月不使用试剂盒，

请将SEM-HRP酶标抗原放置-20℃或者冰冻保存。

检测试剂盒以外需要提供的设备或材料

1)      酶标仪(450 nm)

2)      恒温培养箱

3)      匀浆器

4)      蒸干器

5)      漩涡振荡器

6)      移液枪(50，100mL，1mL各一支)

7)      多道移液器（50-300mL）

8)      乙酸乙酯

9)      0.1M K₂HPO₄

10) 正己烷

注意事项

实验前请阅读以下文字，以保证获得最佳实验效果。

1)      标准品中含有磺胺类试纸条，请小心使用。

2)      不要使用过期的试剂盒。

3)      不同批次的试剂盒不要混用，抗体和微孔板具有盒与批次的特异性。

4)      尽量保持室温20-25℃，避免在通风口操作防止温度过低，过热和/或者蒸发。同样的，不要在阳光直射下实验，防止过热及蒸发。在孵育期间，如果工作台温度过低，应该铺垫若干纸巾或者其他物料。

5)      水质量很重要，确保使用蒸馏或者去离子水。

6)      加入样品或者试剂到空的微孔板时，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接触。

7)      孵育时间的计算越规范越好，保持添加标准品的一致性，先添加标准品后添加样品。

8)      从低浓度到高浓度地添加标准品，降低影响标准品曲线质量的风险。

9)      将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中，冷藏保存。

样品的准备【磺胺类试纸条】

确保样品的正确保存，一般来说，样品在2-4只能保存1-2天，如果要保存更长时间，就要保存在-20冷冻保存，在用之前需要将冷冻的样品在室温下或冰箱内解冻。

1×样品提取液

按1：9的比例配制样品提取浓缩液和双蒸馏水。

1）饲料（用于检测添加到饲料中的鱼粉、虾粉或动物组织的SEM）

（1）    取0.5g匀质样品，加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL蒸馏水，0.5mL 1M HCl和20 µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，涡旋振荡1min；

（2）    50°C恒温培养3小时，在培养期间，每1h振荡5秒；

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，最大转速涡旋震荡1min；

（4）    室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL乙酸乙酯上清液（含0.25g初始样品）到另一试管（避免触及下层水相！如果

移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60-70 °C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品提取液，最大转速涡旋振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：4.0

2）鱼/虾/肉（牛肉/鸡肉/猪肉）：可用于五合一前处理方法

（1）    称取1g匀浆样品加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL蒸馏水，0.5mL 1M HCl和20µL50 mM 2-硝基苯甲醛，涡旋震荡30秒；

（2）    50°C恒温培养3h，培养期间，每1h振荡5秒；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，涡旋震荡振荡30s；

（4）    室温下（20-25℃）4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品)到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），如果出现乳化现象，上清液不足3mL，请85℃水浴3分钟。在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；（注：肝脏组织富含脂肪、色素等，为防止乳化现象，建议选用4mL正己烷溶解，涡旋震荡30秒后，再进行下一步操作）

（7）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡1分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

注意：为了避免过高的背景值，建议用空白样品做平行，从取3ml乙酸乙酯上清旋转蒸发开始。

稀释倍数：2.0

3）鸡蛋【磺胺类试纸条】

（1）    称取1g鸡蛋样品加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL蒸馏水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡30秒；

（2）    50°C恒温培养3小时，在培养期间，每1h振荡5秒；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，涡旋震荡振荡30s；

（4）    室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60-70℃减压蒸馏或60-70℃氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品抽提工作液体，剧烈振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：2.0

注意：为了避免过高的背景值，建议用空白样品做平行，从取3ml乙酸乙酯上清旋转蒸发开始。

4）蜂蜜

（1）    称取1g蜂蜜加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（2）    50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，最大转速振荡1min；

（4）    室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：2.0

5）牛奶

（1）    对于含脂牛奶，取待测牛奶样品3ml室温4000g，5min。除去上层脂肪层。（对于脱脂奶粉，次步略）

（2）    取1ml样品，加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（3）    50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，最大转速振荡1min；室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

     稀释倍数：2.0

6）血清【磺胺类试纸条】

（1）        称取1g血清加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（2）        50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）        加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，最大转速振荡1min；

（4）        室温下4000g离心10分钟；

（5）        取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移

取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）        用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）        加入1mL1×样品提取液，剧烈

（8）        振荡2分钟；

（9）        室温下4000g离心10分钟；

（10）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

     稀释倍数：2.0

7）尿样

（1）    取3ml尿样，4000g离心5min。

（2）    离心后称取1ml，加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（3）    50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，最大转速振荡1min；

（5）    室温下4000g离心10分钟；

（6）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（7）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（8）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡2分钟；

（9）    室温下4000g离心10分钟；

（10）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：2.0

检测步骤

试剂的准备

注意：试剂在使用之前要在室温下解冻1-2小时，确定在使用前阅读过注意事项。准备适量的检测用试剂，所有的试剂摇匀后使用。准备足够所有小管所需的用量，不能将试剂倒回原来的瓶子中，处理试剂时建议用废弃的瓶子以降低污染的风险。

1x洗液的制备

1体积的20x洗液同19体积的蒸馏水混合

检测

\以下为计算份量的表格，用户可根据自己的需要来确定需要配置多少试剂。

（1）    加入100mL的标准品于所设定的孔中；

（2）    加入100mL的样品于所设定的孔中

（3）    在每孔中加入50mL 1×SEM-HRP，轻敲微孔板边缘混匀1分钟；

（4）    室温（22.5±2.5）°C避光孵育30分钟；

（5）    洗板3次，每次应该加入250mL 1×洗液，最后一次使板尽量甩干并在吸水纸上吸干；

（6）    每孔加入100mL的TMB底物；

（7）    在室温（22.5±2.5）°C避光孵育20分钟后，每孔加入100mL的终止液终止反应;

（8）    在450nm或450/650nm下读OD值 (读数前，用吸水纸将板底部的指痕和水分擦去，避免影响读数)。

10．结果计算【磺胺类试纸条】

（1）    分别计算标准、质控和样品的平均吸光度值和相对吸光度值。

相对吸光度值 (%) = (标准或样品吸光度值/零标准吸光度值) ´ 100

（2）    以相对吸光度值为纵坐标，标准浓度为横坐标建立标准曲线。

（3）    从标准曲线上读取质控和样品的浓度值。

（4）    样品检测下限计算方法如下：

样品检测下限 = (0.025ng/g) ´ (稀释倍数)

样品定量下限 = (0.1ng/g) ´ (稀释倍数)

例如，肉类样品的稀释倍数是2.0,那么肉类样品的检测下限是0.05ppb,定量检测下限是0.2ppb。

204545     QuantiTect Multiplex PCR Kit (1000)        "1x 25 ml Master Mix

1x 20 ml RNase free water"    CNY                             

133062     NeXtalStock Magnesium nitrate (200)              CNY                             

133061     NeXtalStock Magnesium formate (200)           CNY                             

870011     therascreen KRAS RGQ PCR Kit CE (24)            CNY                             

290055     mericon VTEC stx1/2 Kit (96)             CNY                             

204341     QuantiTect Probe PCR Kit (40)          "-Trial kit size: 40 x 50 µl rxns at an economical price

- 1x 1ml 2x Master Mix, 1x 2 ml RNase free water

For quantitative, real-time PCR ａnd two-step RT-PCR using sequence-specific probes."         CNY                             

9018392  Key, Data Review, grey, QIAxcel FA          CNY                             

9012271  Power Supply, 24V / 8Amp, (9194)           CNY                             

9001647  Rotor-Gene Q 5plex (w/o PC) System       Rotor-Gene Q 5plex (w/o PC) System includes the Rotor-Gene instrument ａnd installation. The Installation ａnd Introductory Training is an on-site service, conducted by a QIAGEN Service Specialist. It covers the handling of the Rotorgene-Q systems hardware ａnd trains the user on operation of the Rotorgene software. All travel ａnd labor cost included for Installation ａnd service documented on a GMP/GLP-compliant Field Service document.  CNY                             

9015332  Sensor, pressure, M48               CNY                             

9015324  Scrapers, M48 (6)              CNY                              【磺胺类试纸条】

133028     NeXtalStock CAPSO untit. (200)                 CNY                             

133027     NeXtalStock CAPS untit. (200)          CNY                             

129112     RNase-Free Water (12 x 1,9 ml)                CNY                             

81031       Plate Rotor 2 x 96    Rotor for 2 QIAGEN 96-well plates, for use with QIAGEN Centrifuges    CNY                             

80234       Allprep FFPE DNA/ RNA Kit (50)                CNY                             

74134       RNeasy Plus Mini Kit (50)          50 RNeasy Mini Spin Columns, 50 gDNA Eliminator Mini Spin Columns, Collection Tubes Rnase Free  Reagents ａnd Buffers   CNY                             

27106       QIAprep Spin Miniprep Kit (250)      For 250 high-purity plasmid minipreps: 250 QIAprep Spin Columns, Reagents, Buffers, Collection Tubes (2 ml)     CNY                             

20021       QIAEX II Gel Extraction Kit (150)     For 150 extractions: 3 x 0.5 ml QIAEX II Suspension, Buffers  CNY                             

69990       Stainless Steel Beads, 7mm               CNY                             

69975       TissueLyser 5 mm Bead Dispenser, 96-well      For dispensing 96 beads (5 mm diameter) in parallel       CNY                             

19505       QIAvac HiSpeed LS            CNY                             

19090       Buffer RPW (125ml)                   CNY                             

19082       Buffer ASL (4 x 140 ml)     560 ml Stool Lysis Buffer  CNY                             

19065       Buffer PE (concentrate)   100 ml Wash Buffer (5x concentrate for 500 ml buffer)  CNY                             

19052       Buffer P2 500 ml Lysis Buffer   CNY                             

12663       HiSpeed Plasmid Maxi Kit (25)          25 HiSpeed Maxi Tips, 25 QIAfilter Maxi Cartridges, 25 QIAprecipitator Maxi Modules plus Syringes, Reagents, Buffers      CNY                              【磺胺类试纸条】

12245       QIAfilter Plasmid Midi Kit (100)        100 QIAGEN-tip 100, Reagents, Buffers, 100 QIAfilter Midi Cartridges CNY                            

12143       QIAGEN Plasmid Midi Kit (25) 25 QIAGEN-tip 100, Reagents, Buffers    CNY                             

11500       Ultrapure 500 (1)              CNY                             

10083       QIAGEN-tip 2500 (25)      25 columns; 2.5 mg column capacity       CNY                             

133268     NeXtalStock Pentaerythritol ethoxy.(200)                 CNY                             

990602     Elution Plate (10)               CNY                             

QKT0626  钙测定试剂盒Ca    偶氮胂Ⅲ法                                         

QKT0627  视黄醇结合蛋白测定试剂盒RBP免疫比浊法                                                   【磺胺类试纸条】

QKT0628  糖化血红蛋白测定试剂盒HbA1c胶乳凝集反应法                                                  

QKT0629  无机磷测定试剂盒p紫外比色法                                                       

QKT0630  结合胆红素测定试剂盒BCBC-True       酶法                                              

QKT0631  脑脊液与尿蛋白CSF测定试剂盒                                               

QKT0632  α1微球蛋白测定试剂盒α1-MG免疫比浊法                                                 

QKT0633  尿微量白蛋白测定试剂盒mAlb免疫比浊法                                                     

QKT0634  乙型肝炎病毒核酸荧光定量检测试剂盒                                                  

QKT0635  补体C3测定试剂盒C3免疫比浊法                                                   

QKT0636  补体C4测定试剂盒C4免疫比浊法                                                   

QKT0637  免疫球蛋白A测定试剂盒lgA免疫比浊法                                               

QKT0638  免疫球蛋白G测定试剂盒lgG免疫比浊法                                              

QKT0639  甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂盒GPDA连续监测法                                                   

QKT0640  α-L-岩藻糖苷酶测定试剂盒AFUPNPF-两点法                                                  

QKT0641  α-L-岩藻糖苷酶测定试剂盒AFUCNPF-连续监测法                                                 

QKT0642  α-淀粉酶测定试剂盒AMY   EPS连续检测法                                           

QKT0643  血管紧张素化酶测定试剂盒ACE两点法                                                   【磺胺类试纸条】

QKT0644  乳酸脱氢酶测定试剂盒LDH-L      速率法                                         

QKT0645  肌酸磷酸激酶测定试剂盒CK速率法                                                

QKT0646  肌酸激酶同工酶测定试剂盒CK-MB速率法                                                      

QKT0647  超敏C-反应蛋白测定试剂盒H-CRP免疫比浊法                                                       

QKT0648  α-羟基丁酸脱氢酶测定试剂盒α-HBDH速率法                                                      

QKT0649  D二聚体测定试剂盒D-Dimer免疫比浊法                                               

QKT0650  同型半胱氨酸测定试剂盒HCY酶循环法                                                  

QKT0651  二氧化碳测定试剂盒CO2     比色法                                         

QKT0652  镁测定试剂盒Mg甲基百里香酚兰法                                               

QKT0653  载脂蛋白测定试剂盒APoA1 免疫比浊法                                         

QKT0654  载脂蛋白B测定试剂盒ApoB        免疫比浊法                                         

QKT0655  高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒HDL-C      直接法                                         

QKT0656  总胆固醇测定试剂盒TC酶法                                                     

QKT0657  甘油三脂测定试剂盒TG酶法                                                    

QKT0658  低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒LDL-C直接法