奶酪黄曲霉M1定量检测

奶酪黄曲霉M1定量检测
一、概述：
黄曲霉毒素主要是两种霉菌黄曲霉及 A.paraticus的二级代谢物。这些霉菌在湿热的环境和耕作土地上污染的植物产生。黄曲霉毒素M1（Aflatoxin M1，AFM1）属于自然界最强烈的致癌物质之一，是从牛奶中分离出来的黄曲霉毒素的代谢产物。
本试剂盒利用酶联免疫吸附测定法（ELISA）对牛奶和奶粉中的AFM1含量进行快速、定量检测。
二、原理
本试剂盒是利用直接竞争酶联免疫吸附微孔模式进行检测，灵敏度可达20 ng/kg（ppt）。样品或标准品中游离的黄曲霉毒素M1与酶标抗原竞争结合包被在微孔中的抗体上的结合位点，经洗板洗去多余的酶标抗原与黄曲霉毒素M1后加入反应底物，其与酶标物作用而成蓝色，加入反应停止液后颜色由蓝色转变为黄色，黄色越深则表明黄曲霉毒素M1越少，用酶标仪在450 nm处测定光吸收值可准确定量检测样品中的黄曲霉毒素M1的污染水平。
三、实验需要但试剂盒不提供的试剂和仪器
1、试剂：庚烷，二氯甲烷，甲醇，PBS缓冲液（pH 7.2，3.35 g Na2HPO4 ▪12H2O，0.2 g KH2PO4，0.2 g KCl，8 g NaCl，加蒸馏水至1000 ml）
2、仪器：微孔板酶标仪，涡旋振荡器或超声波粉碎仪或摇床，离心机及离心管，20 μL、200 μL、1 mL移液器，氮吹仪或旋转蒸发仪。
四、结果判定
用酶标仪在450 nm处测得每孔的光吸收值（A）绘制标准曲线。通过标准曲线可准确定量样品中黄曲霉毒素M1的含量。通过标准曲线计算所得值乘以样品处理的稀释因子即为实际样品中黄曲霉毒素M1的含量。
标准曲线：横坐标为黄曲霉毒素M1标准品浓度，纵坐标为百分比（即各标准品孔和样品孔光吸收值除以0 ppt标准品孔光吸收值再乘以100%所得）
低温保存，勿反复打开包装，打开后需尽快使用，切勿受潮


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