Tris-氯化铵红细胞裂解液配制方法

中文名：Tris-氯化铵红细胞裂解液

供应商：上海远慕

产品规格：100ml

分类：细胞组分离

储存方式：4℃,12个月

产品用途：Tris-NH4CL法溶解红细胞,去除细胞悬液中的红细胞

说明：无菌溶液，pH值为7.2，经过滤除菌处理

Tris-氯化铵红细胞裂解液说明

1.本品是一种从人，鼠或其他哺乳动物等体内的组织样品或血液中裂解并去除无核红细胞的溶！主要有效成分为氯化铵，本品经过优化配方后，在裂解无核红细胞的同时几乎不损伤淋巴细(lymphocyte)或其它有细胞核的细胞。

2.本品经过滤除菌，经过Tris-NH4ClLysisBuffer处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的细胞培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测。

公司介绍

远慕生物是家专业代理生产销售为一体的优质科研试剂供应商，已和国内多所高校，医院，事业单位，生物公司，科研院等达成了长期合作关系 ，由我们为其提供不同系列的进口试剂及国产试剂，包含有：ELISA试剂盒，培养基，抗体，氨基酸，细胞株，微生物，生物分子，生化试剂，生物试剂，染色液，缓冲液，溶液，实验耗材，动物血清血浆，标准品对照品，其他系列试剂等，品种齐全，价格实惠，我们还提供ELISA试剂盒免费代测服务，欢迎来电咨询，我们将竭诚为您解答每一个问题！

Tris-氯化铵红细胞裂解液操作步骤

1.制备细胞悬液：新鲜组织经过胰蛋白酶或胶原酶等消化处理，通过适当方法制备成细胞悬液，离心弃上清；

2.裂解：加入细胞5倍细胞沉淀体积的Tris-NH4Cl Lysis Buffer，轻柔吹打混匀，裂 解1～2min。本操作步骤在4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作；

3.加入15～20ml的 PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀；

4.离心：4℃，400～500g离心5min，弃红色上清，本步骤亦可在室温下操作；

5.如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2～4各一次；

6.根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。

Tris-氯化铵红细胞裂解液配制方法 

1.10 g葡萄糖+0.6 g磷酸二氢钾+3.58 g磷酸氢二钠（7H2O）+20 ml 5 g/L酚红溶液；加双蒸水定容至1 000 ml。

2.1.86 g氯化钙（2H2O）+4.0 g氯化钾+80 g氯化钠+1.04 g氯化镁+2.0 g硫酸镁（7H2O）；加双蒸水定容至1 000 ml。

注：应用液有3种

a，10 ml原液1号+10 ml原液2号，加双蒸水定容至100 ml

b，20 ml原液1号+20 ml原液2号，加双蒸水定容至100 ml

c，1ml原液1号+1 ml原液2号，加双蒸水定容至100 ml

3.红细胞裂解
取100 μl抗凝全血、加2 ml应用液3#、混匀15～20 s、加2 ml应用液2#、混匀15～20 s、加4 ml应用液1#、混匀15～20 s、300×g离心2 min、弃上清、收集沉淀、加PBS缓冲液、制成白细胞悬液、备用。

4.红细胞裂解液(0.01mol/L Tris-HCL pH7.6、0.01mol/L NaCl、0.005mol/L MgCl2)。

5.红细胞裂解液（139.6 mmol/L NH4Cl、16.96 mmol/L Tris、用1 mol/L HCl调 pH至7.2）。

6.红细胞裂解液的制备：碳酸氢钾（KHCO3）1.0g、氯化氨（NH4CL）8.3g、EDTA-Na2 0.037g、加双蒸水至1000ml，即工作液。

Tris-氯化铵红细胞裂解液配制方法注意事项

1.制备细胞悬液是应根据具体实验需要；不一定要制备成单细胞悬液。

2.后续试验如果是用于细胞培养；操作过程中应注意无菌操作；尽量在超净工作台内操作。

3.离心步骤尽量在4℃离心机上操作。

4.离心洗涤后；通常极微量的红细胞不会影响后续的检测。

5.如果经过Tris-NH4Cl Lysis Buffer处理后的样品后续用于总RNA的提取；在处理细胞时不必使用DEPC处理的溶液；即无需在该操作中特意去除RNase。

6.为了您的安全和健康；请穿实验服并戴一次性手套操作。

7.在实际操作过程中；一定要按照说明书的要求进行正确的操作。

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