真核生物基因的转录起始需转录因子参与,转录因子通常由DNA结合结构域(DNA—binding domain,BD)和转录激活结构域(activation domain,AD)。用于酵母单杂交系统的酵母GAL4蛋白是一种典型的转录因子,GAL4的DNA结合结构域靠近羧基端,含有几个锌指结构,可激活酵母半乳糖苷酶的上游激活位点(UAS),而转录激活结构域可与RNA聚合酶或转录因子TFIID相互作用,提高RNA聚合酶的活性。在这一过程中,DNA结合结构域和转录激活结构域可完全独立地发挥作用。在GAL4系统中构建与基因的ORFs融合的激活结构域GAL4-AD的特异载体,顺式作用元件与GAL4的DNA结合结构域GAL4-BD融合构建载体,分别转化酵母细胞。在酵母内表达的蛋白若与顺式作用元件发生相互作用时,就会将GAL4-BD和GAL4-AD结合在一起,从而与上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)结合,激活相应报告基因的表达,在相应的营养缺陷型培养基上筛选阳性。
基因转录实际上是转录调控因子和启动子区各种顺式作用元件相互作用的结果,这种结合犹如蛋白质与蛋白质的互作一样具有特异性,这是研究顺式作用元件即DNA序列与蛋白质互作的基础。
我公司总经理毕业于华中农业大学生化与分子生物学专业,博士期间长期从事酵母单/双杂交文库构建及筛选(Clontech体系,针对胞浆蛋白和核蛋白)的工作,在校期间为实验室构建了3个高效的水稻酵母双杂交文库(组织分别为水稻叶片,幼穗,种子),具有丰富的实践经验。本公司在RNA抽提,mRNA纯化,酵母转化等步骤中对于试剂选择有着独到的见解,用性价比最高的试剂为客户节约成本。同时公司对于反转录,酵母转化,酵母菌落PCR等步骤进行优化,使得初始基因丰度更高,最大程度保证互作基因/蛋白不致遗漏;转化效率更高,提高弱互作因子筛到的可能性;均一化更高,降低重复筛到概率;空载体更少,高效并且节约成本。
通过RNA提取,mRNA分离,cDNA合成,cDNA长度分级,分级后的cDNA与酵母单杂交载体(pGADT7-Rec2)进行infusion重组,重组后产物转化感受态细胞,文库铺板检测与菌液保存获得插入片段>500bp(插入片段不是越长越好,较长的片段可能会漏筛部分较小片段的互作基因),重组率>90%,库容≥1 x 108 transformants,滴度≥2 x 107cfu/ml的酵母单杂交文库。
客户提供新鲜组织或细胞,25个工作日交付酵母单杂交文库构建报告(电子版),酵母单杂交文库构建图片(电子版),淳风生物科技,.淳风生物科技|||西宁酵母单杂交文库实验外包
,西安淳风生物科技有限公司,转化到酵母细胞的单杂交文库甘油菌100ml。可用于酵母单杂交,酵母双杂交,酵母三杂交文库的筛选。
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.淳风生物科技|||乌鲁木齐亚细胞定位技术服务西安淳风生物科技有限公司是由在国内科研领域有着多年从业经验的专业团队于年月组建而成、专门从事分子生物学技术服务为主、兼顾分子生物学相关产品的专业化科研公司。公司总经理毕业于华中农业大学生化与分子生物学专业,读博期间一手组建并优化了酵母双杂交文库构建及筛选,ChIP等实验体系,有丰富的科研实践经验。公司团队成员来源于武大,华科,华农等国内知名高校,在分子生物学操作方面炉火纯青。我们服务的实验项目主要有:酵母单/双杂交文库构建及筛选,酵母单/双杂交点对点,ChIP,RIP,EMSA,BiFC,’ RACE,双荧光素酶报告基因系统,亚细胞定位,载体构建,基因扩增,全基因合成,相对荧光定量,绝对荧光定量,甲基化检测,原位杂交,染色体步移等分子生物学技术服务。公司成立以来,已经与西安交通大学,陕西师范大学,西北大学,唐都医院,西京医院,西北农林科技大学,华中农业大学,贵州师范大学等国内多所知名高校医院展开了广泛而有效的合作,专业的技能和完善的售后为我们赢得了客户的称赞和信赖。在不久的将来,公司希望能够为广大科研工作者尽一份力,为祖国生物学产业的腾飞添砖加瓦!