Invitrogen核/膜系统
一、 实验原理：
酵母双杂交系统是在酵母体内通过重建有活性转录因子的结构来鉴定蛋白质之间的相互作用。转录因子可以和DNA上特异的序列结合而启动相应基因的转录。这种DNA结合与转录激活的功能是由转录因子上两个相互独立的结构域即DNA结合结构域(Binding Domain, BD)和转录激活结构域(Activation Domain, AD)分别来完成的，并且这两个结构域对于基因的转录激活都是必须的。在GAL4系统中利用转录因子GAL4的DNA结合结构域GAL4-BD与激活结构域GAL4-AD的特异载冂体，分别与基因的ORFs融合，转化酵母细胞。在酵母内表达的蛋白若发生相互作用时，就会将GAL4-BD和GAL4-AD结合在一起，从而与上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)结合，激活相应报告基因的表达，在相应的营养缺陷型培养基上筛选阳性。酵母双杂交文库的构建是筛库的前提，可用于目的蛋白的互作蛋白大规模筛选分析蛋白质间的相互作用，是现在分子生物学与生物化学常用的手段。
二、实验步骤：
1.1 RNA提取
1.2 mRNA分离
1.3 cDNA初级文库的构建
1.3.1 cDNA第一链的合成
1.3.2 cDNA第二链的合成
1.3.3 cDNA adapter的制备
1.3.4 cDNA与attB1重组接头连接(三份接头各连一份)
1.3.5 cDNA分级分离
1.3.6 BP重组
1.3.7 电转化大肠杆菌DH10B
1.3.8 文库克隆检测
1.3.9 文库库容量、重组率、插入片段长度鉴定
1.4 cDNA次级文库的构建
1.4.1 初级文库的质粒抽提
1.4.2 LR重组
1.4.3 电转化大肠杆菌DH10B
1.4.4 文库克隆检测
1.4.5 文库库容量、重组率、插入片段长度鉴定
三、实验结果：
次级文库库容大于107，重组率大于90%，平均插入片段大于1kb。
Invitrogen核/膜系统
一、 实验原理：
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二、实验步骤：
1.1 RNA提取
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1.3 cDNA初级文库的构建
1.3.1 cDNA第一链的合成
1.3.2 cDNA第二链的合成
1.3.3 cDNA adapter的制备
1.3.4 cDNA与attB1重组接头连接(三份接头各连一份)
1.3.5 cDNA分级分离
1.3.6 BP重组
1.3.7 电转化大肠杆菌DH10B
1.3.8 文库克隆检测
1.3.9 文库库容量、重组率、插入片段长度鉴定
1.4 cDNA次级文库的构建
1.4.1 初级文库的质粒抽提
1.4.2 LR重组
1.4.3 电转化大肠杆菌DH10B
1.4.4 文库克隆检测
1.4.5 文库库容量、重组率、插入片段长度鉴定
三、实验结果：
次级文库库容大于107，重组率大于90%，平均插入片段大于1kb。
Invitrogen核/膜系统
一、 实验原理：
酵母双杂交系统是在酵母体内通过重建有活性转录因子的结构来鉴定蛋白质之间的相互作用。转录因子可以和DNA上特异的序列结合而启动相应基因的转录。这种DNA结合与转录激活的功能是由转录因子上两个相互独立的结构域即DNA结合结构域(Binding Domain, BD)和转录激活结构域(Activation Domain, AD)分别来完成的，并且这两个结构域对于基因的转录激活都是必须的。在GAL4系统中利用转录因子GAL4的DNA结合结构域GAL4-BD与激活结构域GAL4-AD的特异载体，分别与基因的ORFs融合，转化酵母细胞。在酵母内表达的蛋白若发生相互作用时，就会将GAL4-BD和GAL4-AD结合在一起，从而与上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)结合，激活相应报告基因的表达，在相应的营养缺陷型培养基上筛选阳性。酵母双杂交文库的构建是筛库的前提，可用于目的蛋白的互作蛋白大规模筛选分析蛋白质间的相互作用，是现在分子生物学与生物化学常用的手段。
二、实验步骤：
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1.3.8 文库克隆检测
1.3.9 文库库容量、重组率、插入片段长度鉴定
1.4 cDNA次级文库的构建
1.4.1 初级文库的质粒抽提
1.4.2 LR重组
1.4.3 电转化大肠杆菌DH10B
1.4.4 文库克隆检测
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三、实验结果：
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.淳风生物科技|||石家庄双荧光素酶报告基因技术服务西安淳风生物科技有限公司是由在国内科研领域有着多年从业经验的专业团队于年月组建而成、专门从事分子生物学技术服务为主、兼顾分子生物学相关产品的专业化科研公司。公司年加入中国农业科学院采购系统等大型政府采购平台，同时是丁香通金牌供应商。公司总经理谢士勇博士毕业于华中农业大学生化与分子生物学专业，读博期间一手组建并优化了酵母双杂交文库构建及筛选，CHIP等实验体系，有丰富的科研实践经验。公司团队成员来源于武大，华科，华农等国内知名高校，在分子生物学操作方面炉火纯青。我们服务的实验项目主要有：酵母单/双杂交文库构建及筛选，酵母单/双杂交点对点，染色质免疫共沉淀（ChIP），双分子荧光互补（BIFC），双荧光素酶报告基因实验，亚细胞定位，载体构建，基因扩增，全基因合成，相对荧光定量，绝对荧光定量等分子生物学技术服务。公司成立以来，已经与西安交通大学，陕西师范大学，西北大学，西北农林科技，空军军医大学，西京医院，唐都医院，华中农业大学，贵州师范大学等国内多所知名高校医院展开了广泛而有效的合作，专业的技能和完善的售后为我们赢得了客户的称赞和信赖。在不久的将来，公司希望能够为广大科研工作者尽一份力，为祖国生物学产业的腾飞添砖加瓦！
