Invitrogen核/膜系统
一、 实验原理：
真核生物基因的转录起始需转录因子参与，转录因子通常由DNA结合结构域(DNA—binding domain，BD)和转录激活结构域(activation domain，淳风生物科技,.淳风生物科技，r杭州酵母单杂交文库技术服务
,西安淳风生物科技有限公司，AD)。用于酵母单杂交系统的酵母GAL4蛋白是一种典型的转录因子，GAL4的DNA结合结构域靠近羧基端，含有几个锌指结构，可激活酵母半乳糖苷酶的上游激活位点(UAS)，而转录激活结构域可与RNA聚合酶或转录因子TFIID相互作用，提高RNA聚合酶的活性。在这一过程中，DNA结合结构域和转录激活结构域可完全独立地发挥作用。在GAL4系统中构建与基因的ORFs融合的激活结构域GAL4-AD的特异载体，顺式作用元件与GAL4的DNA结合结构域GAL4-BD融合构建载体，分别转化酵母细胞。在酵母内表达的蛋白若与顺式作用元件发生相互作用时，就会将GAL4-BD和GAL4-AD结合在一起，从而与上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)结合，激活相应报告基因的表氵达，在相应的营养缺陷型培养基上筛选阳性。基因转录实际上是转录调控因子和启动子区各种顺式作用元件相互作用的结果，这种结合犹如蛋白质与蛋白质的互作一样具有特异性，这是研究顺式作用元件即DNA序列与蛋白质互作的基础。
二、实验步骤：
1.1 RNA提取
1.2 mRNA分离
1.3 cDNA初级文库的构建
1.3.1 cDNA第一链的合成
1.3.2 cDNA第二链的合成
1.3.3 cDNA adapter的制备
1.3.4 cDNA与attB1重组接头连接(三份接头各连一份)
1.3.5 cDNA分级分离
1.3.6 BP重组
1.3.7 电转化大肠杆菌DH10B
1.3.8 文库克隆检测
1.3.9 文库库容量、重组率、插入片段长度鉴定
1.4 cDNA次级文库的构建
1.4.1 初级文库的质粒抽提
1.4.2 LR重组
1.4.3 电转化大肠杆菌DH10B
1.4.4 文库克隆检测
1.4.5 文库库容量、重组率、插入片段长度鉴定
三、实验结果：
次级文库库容大于107，重组率大于90%，平均插入片段大于1kb。Invitrogen核/膜系统
一、 实验原理：
真核生物基因的转录起始需转录因子参与，转录因子通常由DNA结合结构域(DNA—binding domain，BD)和转录激活结构域(activation domain，AD)。用于酵母单杂交系统的酵母GAL4蛋白是一种典型的转录因子，GAL4的DNA结合结构域靠近羧基端，淳风生物科技,.淳风生物科技，r杭州酵母单杂交文库技术服务
,西安淳风生物科技有限公司，含有几个锌指结构，可激活酵母半乳糖苷酶的上游激活位点(UAS)，而转录激活结构域可与RNA聚合酶或转录因子TFIID相互作用，提高RNA聚合酶的活性。在这一过程中，DNA结合结构域和转录激活结构域可完全独立地发挥作用。在GAL4系统中构建与基因的ORFs融合的激活结构域GAL4-AD的特异载体，顺式作用元件与GAL4的DNA结合结构域GAL4-BD融合构建载体，分别转化酵母细胞。在酵母内表达的蛋白若与顺式作用元件发生相互作用时，就会将GAL4-BD和GAL4-AD结合在一起，从而与上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)结合，激活相应报告基因的表达，在相应的营养缺陷型培养基上筛选阳性。基因转录实际上是转录调控因子和启动子区各种顺式作用元件相互作用的结果，这种结合犹如蛋白质与蛋白质的互作一样具有特异性，这是研究顺式作用元件即DNA序列与蛋白质互作的基础。
二、实验步骤：
1.1 RNA提取
1.2 mRNA分离
1.3 cDNA初级文库的构建
1.3.1 cDNA第一链的合成
1.3.2 cDNA第二链的合成
1.3.3 cDNA adapter的制备
1.3.4 cDNA与attB1重组接头连接(三份接头各连一份)
1.3.5 cDNA分级分离
1.3.6 BP重组
1.3.7 电转化大肠杆菌DH10B
1.3.8 文库克隆检测
1.3.9 文库库容量、重组率、插入片段长度鉴定
1.4 cDNA次级文库的构建
1.4.1 初级文库的质粒抽提
1.4.2 LR重组
1.4.3 电转化大肠杆菌DH10B
1.4.4 文库克隆检测
1.4.5 文库库容量、重组率、插入片段长度鉴定
三、实验结果：
次级文库库容大于107，重组率大于90%，平均插入片段大于1kb。Invitrogen核/膜系统
一、 实验原理：
真核生物基因的转录起始需转录因子参与，转录因子通常由DNA结合结构域(DNA—binding domain，BD)和转录激活结构域(activation domain，AD)。用于酵母单杂交系统的酵母GAL4蛋白是一种典型的转录因亠子，GAL4的DNA结合结构域靠近羧基端，含有几个锌指结构，可激活酵母半乳糖苷酶的上游激活位点(UAS)，而转录激活结构域可与RNA聚合酶或转录因子TFIID相互作用，提高RNA聚合酶的活性。在这一过程中，DNA结合结构域和转录激活结构域可完全独立地发挥作用。在GAL4系统中构建与基因的ORFs融合的激活结构域GAL4-AD的特异载体，顺式作用元件与GAL4的DNA结合结构域GAL4-BD融合构建载体，分别转化酵母细胞。在酵母内表达的蛋白若与顺式作用元件发生相互作用时，就会将GAL4-BD和GAL4-AD结合在一起，从而与上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)结合，激活相应报告基因的表达，在相应的营养缺陷型培养基上筛选阳性。基因转录实际上是转录调控因子和启动子区各种顺式作用元件相互作用的结果，这种结合犹如蛋白质与蛋白质的互作一样具有特异性，这是研究顺式作用元件即DNA序列与蛋白质互作的基础。
二、实验步骤：
1.1 RNA提取
1.2 mRNA分离
1.3 cDNA初级文库的构建
1.3.1 cDNA第一链的合成
1.3.2 cDNA第二链的合成
1.3.3 cDNA adapter的制备
1.3.4 cDNA与attB1重组接头连接(三份接头各连一份)
1.3.5 cDNA分级分离
1.3.6 BP重组
1.3.7 电转化大肠杆菌DH10B
1.3.8 文库克隆检测
1.3.9 文库库容量、重组率、插入片段长度鉴定
1.4 cDNA次级文库的构建
1.4.1 初级文库的质粒抽提
1.4.2
.淳风生物科技___r杭州酵母单杂交文库技术服务
.淳风生物科技|||石家庄双荧光素酶报告基因技术服务西安淳风生物科技有限公司是由在国内科研领域有着多年从业经验的专业团队于年月组建而成、专门从事分子生物学技术服务为主、兼顾分子生物学相关产品的专业化科研公司。公司年加入中国农业科学院采购系统等大型政府采购平台，同时是丁香通金牌供应商。公司总经理谢士勇博士毕业于华中农业大学生化与分子生物学专业，读博期间一手组建并优化了酵母双杂交文库构建及筛选，CHIP等实验体系，有丰富的科研实践经验。公司团队成员来源于武大，华科，华农等国内知名高校，在分子生物学操作方面炉火纯青。我们服务的实验项目主要有：酵母单/双杂交文库构建及筛选，酵母单/双杂交点对点，染色质免疫共沉淀（ChIP），双分子荧光互补（BIFC），双荧光素酶报告基因实验，亚细胞定位，载体构建，基因扩增，全基因合成，相对荧光定量，绝对荧光定量等分子生物学技术服务。公司成立以来，已经与西安交通大学，陕西师范大学，西北大学，西北农林科技，空军军医大学，西京医院，唐都医院，华中农业大学，贵州师范大学等国内多所知名高校医院展开了广泛而有效的合作，专业的技能和完善的售后为我们赢得了客户的称赞和信赖。在不久的将来，公司希望能够为广大科研工作者尽一份力，为祖国生物学产业的腾飞添砖加瓦！
