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Gateway技术是克隆和亚克隆DNA序列的一项新颖的通用系统，便于功能基因的分析和蛋白质的表达。一旦进入这个多功能的操作系统，DNA丨片段可以通过位点特异的重组在载体之间转移。

Gateway技术是基于已研究的非常清楚的λ噬菌体位点特异重组系统（attB x attP →attL x attR）。BP和LR两个反应就构成了Gateway技术。BP反应是利用一个attB DNA丨片段或表达克隆和一个attP供体载体之间的重组反应，创建一个入门克隆。LR反应是一个attL入门克隆和一个attR目的载体之间的重组反应。LR反应用来在平行的反应中转移目的序列到一个或更多个目的载体。

在BP反应中基因转移形成入门克隆，在LR反应中入门克隆可以作为反应物产生最终的表达克隆。

完成构建Gateway表达克隆仅需两步：

（1）创建入门克隆，通过PCR或传统的克隆方法将目的基因克隆进入门载体。

（2）混合包含目的基因的入门克隆和合适的目的载体以及Gateway LR Clonase酶，构建表达克隆。（表达克隆用来在合适的宿主中进行蛋白的表达和分析。）

有几种方法可以构建Gateway入门克隆。无论选择何种方法，创建的入门克隆都是准备用来与各种目的载体进行重组。

（1）PCR克隆（定向TOPO克隆至入门载体或与供载体B×P重组）

（2）限制性内切酶消化和连接进入入门载体

（3）使用pCMV•SPORT6或pEXP-AD502*构建Gateway兼容cDNA文库

（4）Gateway改造过的克隆资源*

* 这些克隆资源和cDNA文库两边加有attB位点。这些克隆可以通过与供载体及BP Gateway酶反应转换到入门载体。获得已有克隆资源的更多信息。

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