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产品名称: 大鼠骨保护素ELISA试剂盒价格联系电话:021—60449724,13296089724
可测种属:人、大小鼠、豚鼠、兔子、猪、犬、猴、马…
可测标本:血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液
规格:96T/48T 中英文双版说明书 提供代测 含税含运费
经营品牌:RD
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:2-8℃。
2.有效期:6个月
运输条件:低温运输,用干冰或者冰袋低温运输。ELISA试剂盒的概念、原理、操作步骤
ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来,发展十分迅速,目已被广泛用于生物学和医学科学的许多域。
() 原理
ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、牽9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法(图a)、用于检测抗原的双抗体夹心法(图b)以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。
(二) 大鼠骨保护素ELISA试剂盒 操作步骤
方法 用于检测未知抗原的双抗体夹心法:
1.包被:用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2.加样:加定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3.加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。
4.加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。
5.终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或浅,依据所呈颜色的深浅,以“+"、“-"号表示。也可测O·D值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔O·D值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
方法二 用于检测未知抗体的间接法:
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。加定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,37℃孵育30-60分钟,洗涤,后遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法"的4、5、6。
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