艾美捷ELISpot常见疑难问题解答

ELISpot原理：将细胞置于包被有特异性抗体的96孔板中培养，在有刺激的条件下，细胞分泌的细胞因子或免疫球蛋白会被包被抗体捕获。移除细胞后，被捕获的细胞因子可进步使用生物素标记的二抗来标识，其后再与酶标记的亲和素作用，并加入底物使其呈色，有反应作用的细胞会留下直径大小不等的染色斑点。

常见疑难问题解答：

1.推荐哪种ELISpot板子？

建议使用PVDF膜的96孔ELISpot板子，有效结合大量捕获抗体，提是膜用乙醇预处理（即活化）。

2.板的颜色是否重要，我应选择白色板子还是透明板子？

白色和透明ELISpot板具有相同类型的PVDF膜。这两种颜色在读板仪中略有不同，但并不重要。（如果有没有添加液体的漏掉的孔，透明的板子很容易看见。）

3.包被为什么要用乙醇对ELISpot板进行预处理？

ELISpot板子的膜具有多孔疏水结构。为了使大量捕获抗体能够结合，应该用乙醇处理膜以使其亲水。这是获得高质量斑点所必需的致密抗体包被层。ELISpot板子的逐步预包被和EtOH处理的protocol。

4.冷冻细胞可以用于ELISpot吗？

冷冻保存的细胞非常适合ELISpot。然而，其结果取决于细胞的质量，必须建立冷冻/解冻的程序以产生具有高活力的细胞。标准冷冻程序应包括使用DMSO和胎牛血清或类似物，并逐步冷冻程序。

5.在ELISpot中每孔使用多少个细胞？

必须将每个孔中的细胞数量调整为细胞类型和分泌细胞的预期频率。如果频率非常低，例如10,000个细胞中的1个，则需要更多数量的细胞，通常约250,000个细胞/孔。当分泌细胞的频率高时，例如10个细胞中的1个，约5,000个细胞/孔就足够了。细胞数量在测定中并不总是显示线性，因为需要细胞-细胞的zui佳接触，例如抗原呈递细胞的充分刺激。当分析抗原特异性T细胞时，PBMC不应低于每孔200,000个细胞。

通常不建议使用超过500,000个细胞/孔，因为这可能产生多个细胞层，反过来由于细胞和ELISpot膜之间的距离增加而导致斑点质量降低。

6.可以在ELISpot中使用人血清吗？

由于以下原因，不建议在ELISpot中使用人血清。当分析人类样品时，感兴趣的分析物（例如IFN-γ或IgG）实际上可能存在于血清中。由于分析物将与捕获和检测抗体结合，因此会导致膜变暗。人血清可能含有嗜异性抗体，其可与来自许多物种的Ig交叉反应。这种反应可能会导致双抗夹心免疫检测中抗体交联的问题。在ELISpot中，它将导致膜的普遍变暗。

（...更多问题，可以访问艾美捷）

下面介绍下艾美捷各应用域“Top 3”ELISpot试剂盒研究工具，适用多种种属，发表多篇高分文章。

针对不同的研究需要，使用不同格式的ELISpot试剂盒，从ELISpotBASIC到完整的ELISpotPRO试剂盒。

分析物（指标）与种属的对应表格（如下指标均有对应产品）：

* 以上仅适用于科学研究使用.来源：艾美捷