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抗PsbA抗体不会检测D2蛋白,因为用于产生PsbA抗体的肽与D2序列没有同源性。艾美捷 PsbA|D1 protein of PSII应用实例:
不同数量的PsbA蛋白质标准品(AS01 016S)250 fmol(1)、125 fmol(2)、62.5 fmol(3)、31.25 fmol(4)、15.625 fmol(5)和2µg总蛋白,从使用蛋白质提取缓冲液PEB(AS08 300)提取的Med4(6,7)中提取。样品用1X样品缓冲液(NuPAGE LDS样品缓冲液(Invitrogen))稀释,补充50 mM DTT,在70°C下加热5分钟,并在装载保持在冰上。蛋白质样品在4-12%的Bolt Plus凝胶、LDS-PAGE上分离,并使用罐转移法在PVDF上吸附70分钟。在室温下搅拌2%封闭剂或5%非脂肪乳(溶解于20 mM Tris、137 mM氯化钠pH 7.6和0.1%(v/v)吐温-20(TBS-T)中)1小时后,立即封闭印迹。在室温下搅拌,以1:10000的稀释度(在封闭试剂中)在抗体中培养印迹1h。倾析抗体溶液,短暂冲洗印迹两次,然后在室温下搅拌,用TBS-T清洗1x15分钟和3x5分钟。将印迹在二抗体(山羊抗兔IgG-辣根过氧化物酶结合物,推荐二抗体AS09 602,Agrisera)中培养,在室温下搅拌,在封闭试剂中稀释至1:25 000,持续1h。按上述方法清洗污渍。根据制造商的说明,使用化学发光检测试剂开发印迹。使用CCD成像仪(VersaDoc MP 4000)和Quantity One软件(Bio-Rad)获得斑点图像。曝光时间为30。
参考资料:
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Khajuria et al. (2020). Photochemical Efficiency Is Negatively Correlated With the ? 9- Tetrahydrocannabinol Content in Cannabis Sativa L. Plant Physiol Biochem. 2020 Apr 8;151:589-600. doi: 10.1016/j.plaphy.2020.04.003.
Agrisera公司提供的植物域的抗体涵盖拟南芥、莱茵衣藻、蓝藻、松柏类、硅藻、大豆、大麦、蒺藜苜蓿等等。艾美捷科技是Agrisera的中国代理商,为科研工作者提供优质的PsbA|D1 protein of PSII。
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