钙含量比色检测试剂盒测定方案

钙离子通道控制钙离子在细胞膜上的迁移，允许激活和抑制多种酶。低钙的原因这些水平包括慢性肾功能衰竭、维生素D缺乏和低血镁水平这可能发生在严重的酒精中毒。BioVision的比色钙测定试剂盒利用钙离子与0-甲酚酞形成的显色络合物（λ=575nm），以在生理上重要的钙浓度0.4范围内提供种简单的测定方法-100毫克/分升（0.1-25毫米）。

艾美捷 BioVision 钙比色法检测试剂盒利用钙离子和O-苯酞酚形成的显色复合物（λ = 575 nm）的原理，使用O-苯酞酚与样本中的钙离子反应后通过比色计或分光光度计实现定量.

钙含量比色检测试剂盒测定方案：

1.标准曲线制备：通过添加10%的钙，将钙标准稀释至5 mM（20 mg/dL）将500 mM标准溶液的µl与990µl dH2O充分混合。将0,2,4,6,8,10µl添加到系列溶液中每孔提供0,0.4,0.8,1.2,1.6,2.0µg钙。将体积增加到50µl，并使用二氧化二氢。

2.样品制备：血清或尿液样品可直接用于本试验。放置10微升在96孔板中的孔中取样。对于其他液体样品，将2–50µl样品添加到溶液中个人井。用dH2O使总体积达到50µl。样品可以化验没有任何事先治疗。些MRI造影剂会在这种情况下引起短暂的干扰化验

3.补充：

A） 将90µl显色试剂添加到每个含有标准品、样品或试剂的孔中控制并轻轻混合。

B） 向每个孔中添加60µl钙分析缓冲液并轻轻混合。

4.在室温下培养反应5-10分钟。避光。

5.在575 nm处测量外径。发色团是不稳定的，随着时间的推移会稍微褪色，所以在30分钟内阅读标准品和样品。

6.计算：通过减去从0计算得出的值来校正背景所有样品和标准读数的控制（注：背景读数可能为重要，必须从样本读数中减去）。绘制标准曲线µg/井vs。外径575纳米读数。然后将样本读数应用于标准曲线，以获得井中的钙样本量（Sa）。试样中的钙浓度：C=Sa/Sv（微克/微升或毫克/毫升）式中：Sa是标准曲线中的钙样品量（单位：µg）。Sv是添加到样品孔中的样品体积（µl）。钙分子量：40。样品中的钙浓度可以表示为mg/ml、mg/dL或mM（mmol/升）。1毫克/毫升=100毫克/分升；1毫米=4毫克/分升

图：（a） 标准曲线。（b） 从汇集的人血清（10μl，1:1稀释）和混合人类尿液（10μl，1:1稀释）。试验在试验结束后进行工具包协议。

来源：https://www.amyjet.com/featured/nitric-oxide-fluorometric-assay.shtml