钙比色检测试剂盒，艾美捷现货供应

艾美捷 BioVision镁比色检测试剂盒提供了种简单灵敏的方法定量检测多种生物样品中的镁.本试剂盒基于甘油激酶对Mg2+需求的特异性.酶联反应的种产物能显出颜色（λmax = 450nm），该物质的产量与Mg2+浓度成正比.检测范围为2-15 nmoles，检测J限为40 M.

镁比色检测试剂盒分析方案：

1.标准曲线准备：

通过添加10µl 150 nmol/µl镁标准溶液，将标准溶液稀释至1.5 nmol/µl至990µl蒸馏水，充分混合。将0,2,4,6,8,10µl添加到系列孔中。调整体积为50µl/孔，用蒸馏水生成0,3,6,9,12,15 nmol/孔的镁标准。

2.样品制备：组织或细胞可通过4体积的镁分析提取缓冲液，旋转16000g 10分钟，以获得清晰的提取物。向96孔中添加1-50µl液体样品平板，用水使总体积达到50µl。正常血清含有Mg2+0.7-1.05 mM（1.65-2.55 mg/dL），使用5µl血清进行检测。尿液应稀释10倍。对于未知样品，我们建议测试不同数量的取样以确保OD在线性范围内。

3.镁反应混合物：根据样品数量和标准混合足够的试剂待执行：对于每个孔，制备总含量为50µl的反应混合物，其中包含：35µl镁分析缓冲液10µl显影剂5µl镁酶混合物

4.将50µl反应混合物添加到每个含有镁标准和测试的孔中样品。为了获得zui佳结果，使用多通道移液器在所有样品中同时启动反应同时。拌匀。

5.在37℃下培养10分钟。读取铭牌OD450nm，以获得每个标准或标准的A0样品。

注意：

1） 由于酶动力学对温度变化很敏感，因此反应速率将随着温度的升高而增加。反应大约需要10分钟才能达到线性反应速率。

2） 样品中的NAD（P）H等可能会产生背景，10分钟的等待时间可以纠正这些非特异性背景。

3） Mn2+、Zn2+、Ni2+、Fe2+、Cu2+、Co2+、Ca2+不干扰测定。

6.将反应再培养10-30分钟，再次读取OD以获得读数A。建议监测反应动力学，以确保在以下情况下读数在线性范围内：再多读10-30分钟。所有读数不得超过1.5 OD。

7.计算：从标准和样品读数中减去A0得到∆OD=A-A0。情节镁标准曲线。应用样本∆OD到标准曲线，以获得Mg2+量B（nmol）在反应井中。Mg2+浓度：C=B/V（nmol/ml或µM）式中：B为反应井中的Mg2+量（单位：nmol）。V是添加到反应井中的样品体积（ml）。镁分子量：24.3 g/mol，1 mM=2.43 mg/dL。也可以通过监测标准溶液和标准溶液中的反应斜率来计算析样品反应。

镁标准曲线：根据试剂盒方案进行测定。垂直点线表示正常血清Mg2+浓度的下限和上限。

来源：https://www.amyjet.com/featured/nitric-oxide-fluorometric-assay.shtml