Biovision胶原蛋白检测试剂盒方案及注意事项

艾美捷 Biovision总胶原蛋白检测试剂盒（比色法）基于样品中胶原蛋白酸水解产生水解产物和羟脯氨酸，羟脯氨酸被进步氧化代谢产生有色产物，于560 nm处有吸收峰.

该胶原蛋白检测试剂盒组分：

1、96孔平底透明板

2、多阱分光光度计

3、12 M盐酸（浓盐酸）

4、水解：聚丙烯小瓶（BV类别号M1352）和螺帽

艾美捷 Biovision胶原蛋白检测试剂盒检测方案：

1.样品制备：组织或蛋白质/肽样品：组织样品（即肺）应在ddH2O中均匀化，使用100µl每10 mg组织使用ddH2O。向100µl样品匀浆中添加100µl浓HCl（~12 M，未提供），并将其放入个压力合适的聚丙烯螺旋小瓶中。在120°C下水解样品3小时（见注释C）。尿液：用等量水水解样品压力密封聚丙烯螺旋盖小瓶中12m浓HCl（即100µl尿液+100µl HCl）的体积。之后均质，通过添加4 mg活性炭，用活性炭澄清样品。以10000 x g的速度旋转并离心3小时至少清除沉淀和活性炭。如果需要，重复上述步骤。将2-30µl各水解样品转移至96孔板中，并通过在热板/干热块或微孔板培养箱上70°C加热板蒸发至干燥。

注意：

A.对于未知样品，建议进行初步试验，以确保读数在标准曲线范围内，并且相应地调整样品水解液的体积（可使用2-30µl水解液）或在必要时稀释水解液。

B对于胶原蛋白浓度J低的样品，建议平行运行两个测试样品井，并加个使用已知量的I型胶原蛋白标准品（4.0µg），以确保准确测定。

C对于样品水解，带有紧配合螺旋盖（无O形圈）的聚丙烯小瓶产生zui佳结果。推荐Biovision的聚丙烯瓶和盖（类别号M1353和M1352）。

图：（a）水解胶原蛋白I标准曲线（0-10µg）。（b） 大鼠组织中总胶原浓度的估算。鼠肾，肝、肺和肌肉样品用ddH2O均质，并在120°C下用12 M HCl水解3小时。沉淀被分离通过离心（10000 x g，持续3分钟）去除。根据试剂盒测定30微升水解样品协议。胶原含量（mg胶原/g湿组织）：肾脏：2.01±0.22；肝脏：0.71±0.32；肺：3.03±0.3；肌肉：3.25±0.98。