BioVision羟脯氨酸检测试剂盒操作手册

胶原蛋白是哺乳动物和许多疾病中zui丰富的蛋白质被认为会影响胶原蛋白的转化，包括肿瘤的侵袭和转移转移、类风湿性关节炎、心肺纤维化和肌营养不良。经典的Hyp测定方法是基于将Hyp氧化成吡咯中间体，然后与溶解在浓高氯酸中的埃利希试剂反应（HClO4）。高氯酸是种有毒和高活性的有害物质，需要特殊处理和废物处理协议。

艾美捷 BioVision羟脯氨酸检测试剂盒（不含高氯酸盐）使用有的酸性显影液较精确测量Hyp不使用有害高氯酸盐的组织和蛋白质/肽酶水解物。这是个快速方便的协议，产生了颜色鲜艳的发色团，吸收峰为560nm。该检测法可检测到至少0.05µg羟脯氨酸，每孔含0.05µg羟脯氨酸个96孔的格式，并产生比色结果，几乎是相同的经典高氯酸为基础的方法。

艾美捷 BioVision羟脯氨酸检测试剂盒组分：

氧化缓冲液10毫升WM K226-100-1

氯胺T浓缩液600µl红色K226-100-2

显影液5毫升NM K226-100-3

DMAB浓缩液（DMSO）5 ml琥珀色K226-100-4

羟脯氨酸标准品（1 mg/ml）100µl黄色K226-100-5

微孔板密封膜1膜─ K226-100-6

该羟脯氨酸检测试剂盒相关试剂和设备：

1、基于微板的多壁分光光度计

2、用平底清理96孔板

3、10N氢氧化钠（NaOH）和10N盐酸（HCl）

4、水解用：聚丙烯小瓶（BV类别号M1352）和螺帽（BV类别号M1353）

图：（a）羟脯氨酸标准曲线。（b） 羟脯氨酸标准曲线吸光度值之间的相关性经典的基于高氯酸的分析试剂盒（Cat#K555）和无高氯酸盐分析。这两种检测方法显示出良好的相关性（R）2.> 0.999). 个平淡的Altman图表明两次分析之间高度致，平均差异仅为3.06±各方法产生的吸光度值之间的0.33%。（c） 大鼠组织中总羟脯氨酸含量的估算。老鼠腿部肌肉、脾脏、心脏和肺样品用dH2O均质，在120°C下用10N NaOH水解1小时，并用10N盐酸中和。对于每个样品，测定10μlzui终中和水解物。羟脯氨酸水平（按μg羟脯氨酸/mg湿组织）的含量：肌肉为1.71±0.09μg/mg，脾脏为0.47±0.07μg/mg，脾脏为0.56±0.10μg/mg心脏为1.56±0.17μg/mg，肺为1.56±0.17μg/mg。数据为3-4个重复的平均值±SEM，根据试剂盒方案进行分析。