胶原蛋白检测试剂盒（比色法）说明书

在细胞中，胶原蛋白以胶原的形式分泌这些链被运输到内质网，在那里，大量的翻译后修饰导致了内质网的形成具有二硫键的三螺旋结构。胶原蛋白的过度产生与病理状况有关，包括肝硬化、肺结核和肺结核纤维化和肿瘤生长。BioVision的胶原蛋白检测试剂盒是种简单、灵敏的检测多种蛋白质中少量胶原蛋白的检测试剂盒样品的数量。该分析基于样品酸水解形成水解物和羟脯氨酸。这释放了羟脯氨酸氧化形成反应中间体，在反应中进步形成发色团（Abs 560 nm）。

那么，如何选择快速方便的胶原蛋白检测试剂盒试剂盒呢？接下来小艾要介绍的这款胶原蛋白检测试剂盒 检测方法简单，对胶原蛋白敏感且特异，可在各种样本（如组织匀浆）中检测到低至0.5µg的胶原蛋白，生物液体和纯化蛋白质。

艾美捷 胶原蛋白检测试剂盒检测方案：

1、样品制备：组织或蛋白质/肽样品：组织样品（即肺）应在ddH2O中均匀化，使用100µl

每10 mg组织使用ddH2O。向100µl样品匀浆中添加100µl浓HCl（~12 M，未提供），并将其放入个压力合适的聚丙烯螺旋盖小瓶中。在120°C下水解样品3小时（见注释C）。尿液：用等量水水解样品压力密封聚丙烯螺旋盖小瓶中12m浓HCl（即100µl尿液+100µl HCl）的体积。之后均质，通过添加4 mg活性炭，用活性炭澄清样品。以10000 x g的速度旋转并离心3小时至少清除沉淀和活性炭。如果需要，重复上述步骤。将2-30µl各水解样品转移至96孔板中，并通过在热板/干热块或微孔板培养箱上70°C加热板蒸发至干燥。

2、标准品制备：将25µl胶原蛋白I标准品转移到个带螺丝帽的压力密封聚丙烯小瓶中，并添加25µl胶原蛋白12 M浓盐酸（未提供）。牢固拧紧盖并在120°C下水解3小时。在冰上冷却小瓶，然后旋转小瓶内容物（zui终体积为50µl，zui终浓度为1 mg/ml水解胶原蛋白）。添加0、2、4、6、8和10µl的1mg/ml水解I型胶原标准溶液放入96孔板中的系列孔中，生成0、2、4、6、8和10的当量µg胶原蛋白/孔。通过在热板/干热块上70°C加热板，将标准曲线井蒸发至干燥，或微孔板培养箱。注：为防止微孔板塑料翘曲/蚀刻，请勿将微孔板暴露在J端温度（>85°C）下。如果天气炎热使用平板/烤箱时，我们建议将微孔板放置在70°C下，直到内容物完全蒸发

3、反应：向每个样品和标准品中添加100µl氯胺T试剂，并在室温下培养10分钟。添加向每个孔中加入100µl DMAB试剂，并在60°C下培养90分钟。

4、测量：将板从热源上取下，并在560处测量所有样品和标准曲线孔的吸光度端点模式下的nm（OD560）。对于zui大信号强度，在将板从加热炉中取出后20分钟内测量吸光度

5、计算：对于胶原蛋白标准曲线，从所有标准中减去零标准（0μg/孔试剂空白）读数

，绘制背景减去值并计算标准曲线的斜率。对于测试样品，减去零从样品读数中读取标准（0μg/孔试剂空白），并将背景减去的OD560值应用于标准曲线，以在井中获得Bμg胶原蛋白。