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有的人,做了200多次磷酸化蛋白,出结果的只有60几次,与理论致的只有40次不到。令人崩溃。。。
现实情况确实如此,内源性目的蛋白本身在细胞裂解物中表达丰度不高,而其磷酸化修饰的蛋白含量就更低了!即使用高浓度抗体,延长曝光时间,依旧很难获得理想的效果。大多数市售的WB封闭剂(如牛奶,血清,BSA)虽然可以满足阻断膜上的未反应位点,减少检测过程中非特异性抗体的数量,但它们并不是为了在印迹过程中保护磷蛋白抗原而设计的,本身含有磷酸化蛋白成分,因而并不能为磷酸化WB雪中送炭!
接下来就说下解决方案吧~
艾美捷 Cell Biolabs丨磷酸化抗体用:PhosphoBlocker封闭液。
艾美捷 Cell Biolabs丨PhosphoBlocker封闭液特点:
1.与奶粉,血清,BSA相比,更卓越的封闭效果
2.同时,可作为抗体稀释液使用,无需单独购买
3.增强低水平的磷蛋白信号而不增加背景
4.在Western Blot期间保留磷蛋白抗原
5.易于使用的预混合干混合物
艾美捷 Cell Biolabs丨PhosphoBlocker 效果对比:
Fig. A549细胞裂解液,检测磷酸化-p38蛋白.
Cell也在用的磷酸化抗体用封闭液:
Orthofer, Michael, et al. "Identification of ALK in Thinness." Cell181.6 (2020): 1246-1262.
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