多聚ADP-核糖ELISA检测试剂盒标准曲线及样品制备

制备浓度范围为5 nM至0.019 nM的聚（ADP-核糖）标准品稀释系列通过在分析稀释剂中稀释聚（ADP-核糖）标准品（2.5µM）得到的nM。

多聚ADP-核糖ELISA检测试剂盒样品制备：

1、细胞样本：抽吸培养基。用含有1X PARP抑制剂（1）的PBS清洗细胞次mg/mL 3-AB）。向每个培养基中添加1 ml含有1X PARP抑制剂（1mg/ml 3-AB）的RIPA缓冲液10厘米培养皿。在冰上孵育10-20分钟。用电池刮去表面上的电池刮刀转移至离心管，并在4°C下以10000 g离心10分钟。收集样品上清液，添加SDS至终浓度1%，并煮沸（100℃）5分钟。迅速冷却煮沸后将试管置于冰上，然后以10000 g离心5分钟。可对上清液进行分析直接地

2、组织样本：采集后快速冷冻组织（例如，使用液氮）。权衡冷冻组织，并每天添加5-10µL含有1X PARP抑制剂（1mg/mL 3-AB）的RIPA缓冲液毫克的组织。对组织样品进行超声波处理或均质处理（将其置于冰上），并以10000 g离心在4°C下持续10分钟。收集上清液，添加SDS至终浓度1%并煮沸（100°C）持续5分钟。煮沸后在冰上快速冷却试管，然后以10000 g离心5分钟可直接对上清液进行分析。

注：3-氨基苯甲酰胺（3-AB）是PARP的抑制剂，可避免人工合成样品裂解过程中的PAR。

多聚ADP-核糖ELISA检测试剂盒 检测方案：

1、使用，准备并充分混合所有试剂。每个聚（ADP核糖）样品包括未知和标准品应式三份进行分析。

2.将100µL未知样品或聚（ADP核糖）标准品添加到新鲜样品的孔中制备聚ADP核糖抗体涂层板。在室温下，在培养皿上培养1小时轨道振动筛。

3.用250µL 1X清洗缓冲液清洗微孔板条3次，每孔彻底抽吸在每次清洗之间。后次清洗后，清空微孔，并将微孔条轻敲在吸水垫或吸水垫上用纸巾去除多余的1X洗涤缓冲液。

4.向所有孔中添加100µL稀释的抗聚（ADP核糖）检测抗体并孵育在室温下，在轨道振动筛上振动1小时。根据步骤清洗带槽3次上文第3段。

5.向所有孔中添加100µL稀释的二抗体HRP结合物，并培养1小时在室温下，在轨道振动筛上。在试验过程中，将基底溶液加热至室温这是孵化。

6.按照上述步骤3清洗微孔板3次。立即进行下步。

7.加上100mL的基底溶液对每个井，包括空白威尔斯。在室内孵化轨道振动筛上的温度。实际孵化时间可能在2-30分钟之间。

注意：小心观察表盘；如果颜色变化迅速，可能需要尽快停止反应防止饱和。标准曲线上的蓝色渐变在绘制应清晰可见添加停止解决方案。

8、在每孔中加入100μl的停止溶液，包括空白，停止酶反应。威尔斯。应立即读取结果（颜色会随时间褪色）。

9.使用450 nm作为主波，在分光光度计上读取每个微孔的吸光度长

以上，就是多聚ADP-核糖ELISA检测试剂盒样品制备&检测方案。

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