高特异性-艾美捷焦磷酸(PPi)分析试剂盒方案

艾美捷焦磷酸(PPi)分析试剂盒提供了J为强大的分光光度法来测量焦磷酸盐。该试剂盒使用有的荧光焦磷酸酯传感器，其荧光强度与焦磷酸酯的浓度成比例关系。与磷酸盐和ATP相比，

本试剂盒中使用的PPi传感器对PPi具有相当高的选择性。与需要至少两种酶来检测焦磷酸的酶偶联法相比，该检测方法要简单得多，也更稳定。

艾美捷焦磷酸(PPi)分析试剂盒提供了测定焦磷酸的所有基本成分。本试剂盒已成功用于高通量筛选（HTS）。

艾美捷焦磷酸(PPi)分析试剂盒组分：

组份A：检测缓冲液 1瓶（25mL）

成分B: PPi传感器 1小瓶（冻干粉）。

组份C：焦磷酸盐标准品 1瓶（1mL，50mM）。

成分D: DMSO 1小瓶（100微升）

摘要：

准备好PPi传感器工作溶液（50微升）

加入焦磷酸盐标准品和/或检测样品（50 µL）。

在室温下孵育10至30分钟

在 Ex/Em = 370/470 nm（截止点 = 455 nm）处监测荧光强度。

重要说明

在开始实验在室温下解冻所有试剂盒成分。

储备液的制备：

除非另有说明，所有未使用的原液应分成一次性使用的等分，并在制备后储存在-20℃。避免反复冷冻-解冻循环。

1. PPi 传感器储备溶液（200X）。

将 50µL DMSO（成分 D）加入到 PPi 传感器（成分 B）的小瓶中，制成 200X 的 PPi 传感器储备溶液。注意：25 µL 的 PPi 传感器储备液足够用于一个 96 孔板。

制备 1 mM 焦磷酸盐标准液，将 10 µL 50 mM 焦磷酸盐标准液（成分 C）加入 490 µL 检测缓冲液（成分 A），或您选择的缓冲液（丨好是 50 mM Hepes 缓冲液，pH 7）中，制成 1 mM 焦磷酸盐标准液。取1mM焦磷酸盐标准品（PS7）进行1:3的连续稀释，得到用检测缓冲液（成分A）连续稀释的焦磷酸盐标准品（PS6-PS1）。

艾美捷焦磷酸(PPi)分析试剂盒工作溶液的制备：

将 25 µL 200X PPi 传感器储备液加入到 5 mL 检测缓冲液（成分 A）中，并充分混合。注意：由于该检测方法对 PPi 的高度敏感性，使用不含 PPi 的实验器具和试剂非常重要。注意：DTT（1uM）会增加背景，MgCl2≥2mM会降低反应。

图：焦磷酸盐、ATP和磷酸盐的剂量反应是用焦磷酸(PPi)分析试剂盒在纯黑色96孔板中用荧光微板阅读器测量的。

艾美捷焦磷酸(PPi)分析试剂盒部分引文：

1.Biological studies ａnd target engagement of the 2-C-methyl-d-erythritol 4-phosphate cytidylyltransferase (IspD)-targeting antimalarial agent (1 R, 3 S)-MMV008138 ａnd analogs

Authors: Ghavami, Maryam ａnd Merino, Emilio F ａnd Yao, Zhong-Ke ａnd Elahi, Rubayet ａnd Simpson, Morgan E ａnd Fern{\＇a}ndez-Murga, Maria L ａnd Butler, Joshua H ａnd Casasanta, Michael A ａnd Krai, Priscilla M ａnd Totrov, Maxim M ａnd others,

Journal: ACS infectious diseases (2017): 549－－559

2.Structural Insights into Inhibition of Escherichia coli Penicillin-binding Protein 1B

Authors: King, Dustin T ａnd Wasney, Gregory A ａnd Nosella, Michael ａnd Fong, Anita ａnd Strynadka, Natalie CJ

Journal: Journal of Biological Chemistry (2017): 979－－993

3.Biological studies ａnd target-engagement of the 2-C-methyl-D-erythritol 4-phosphate cytidylyltransferase (IspD)-targeting antimalarial agent (1R, 3S)-MMV008138 ａnd analogs

Authors: Ghavami, Maryam ａnd Merino, Emilio Fern ａnd o , undefined ａnd Yao, ZhongKe ａnd Elahi, Rubayet ａnd Simpson, Morgan ａnd Fern, undefined ａnd ez-Murga, Maria ａnd Butler, Joshua Hayden ａnd Casasanta, Michael ａnd Krai, Priscilla ａnd Totrov, Maxim ａnd others, undefined

Journal: ACS Infectious Diseases (2017)

来源：https://www.amyjet.com/products/AAT-21614.shtml