艾美捷nickases内切酶用途和应用实例分析

CRISPR/Cas9 是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御系统，改造后的 II 型 CRISPR/Cas9 系统在基因的定点修饰中展现出巨大的应用潜能。脱靶效应是目 CRISPR/Cas9 技术应用的一个难题，在基因编辑应用中，可能会出现难以预测的后果。

Cas9 Nuclease 具有两个切割活性中心，从而实现在 sgRNA 靶序列特定位点引入 DNA 双链断裂（DSB）。NLS-Cas9（D10A）Nickase 在 Cas9 Nuclease 基础上突变其中一个切割活性中心，其能在与 sgRNA 靶序列互补的DNA 链上产生切口，从而形成功能性的单链断裂，并且通过在蛋白两端加了核定位序列(NLS),可把蛋白送到细胞核内进行基因组编辑， 配合一对 gRNA 使用，可实现 Cas9 Nuclease 相同的基因编辑效果，由于有效的识别序列由 20 bp 增加至 40 bp，可明显减少意外的脱靶基因修饰，从而显著提高 CRISPR/Cas9 技术基因修饰的特异性。

艾美捷nickases内切酶特点：

纯蛋白体系，避免 CRISPR 基因敲除时引入质粒或病毒干扰； 可显著降低脱靶效应。

艾美捷nickases内切酶用途：

1，基于蛋白与 sgRNA 转染的非病毒载体 CRISPR 基因敲除；

2，基于蛋白与 sgRNA 转染的非病毒载体 CRISPR 基因敲入；

3，sgRNA 剪切靶点 DNA 效率检测，降低体内筛选成本；

4，体外剪切靶 DNA 的特异位点。

艾美捷nickases内切酶应用实例：

带有靶位点的超螺旋 DNA（cccDNA）；

酶切产生切刻后的开环 DNA（ocDNA）；

50 -100 ng 酶可有效切割 cccDNA（>95%）。

来源：https://www.amyjet.com/products/P7057.shtml