艾美捷MTT细胞增殖检测试剂盒测定方案

细胞增殖特征包括细胞代谢活性和细胞膜完整性。一个测量代谢活性的方法是用四唑盐如WST-1孵育细胞，通过代谢活性细胞裂解成有色甲product产物。同样，绿色荧光染料Calcein-AM可以测量增殖活细胞中的细胞内酯酶活性是细胞活力的另一个指标。

艾美捷MTT细胞增殖检测试剂盒测定原理：

Cell Biolabs的CytoSelect™ MTT细胞增殖测定提供了比色形式测量和监测细胞增殖。该试剂盒含有足够的试剂用于评估在96孔板中进行960次测定或在24孔板中进行192次测定。细胞可以被镀，然后用影响增殖的化合物或药剂。然后用增殖试剂检测细胞，在活细胞中由黄色四唑MTT转化为紫色福尔马赞形式细胞还原酶（图1）。细胞增殖的增加伴随着信号的增加，虽然细胞增殖（和信号）的减少可以表明化合物的毒性作用或次优的培养条件。该测定原理是基本的，可应用于大多数真核生物细胞系，包括贴壁和非贴壁细胞以及某些组织。这种细胞增殖试剂可用于检测细菌，酵母，真菌，原生动物以及培养的哺乳动物中的增殖

和鱼细胞。

艾美捷MTT细胞增殖检测试剂盒相关研究：

1.CBA-080:CytoSelect™ 24孔失巢凋亡测定

2.CBA-081:CytoSelect™ 96孔失巢凋亡测定

3.CBA-230：细胞衰老测定试剂盒（SA-b-gal染色）

4.CBA-231:96孔细胞衰老测定（SAβ-Gal活性）

5.CBA-232：定量细胞衰老测定（SAβ-Gal）

6.CBA-240：细胞活力和细胞毒性测定

7.CBA-251细胞选择™ BrdU细胞增殖ELISA试剂盒

8.CBA-253细胞选择™ WST-1细胞增殖测定试剂

套件组件

1.MTT细胞增殖测定试剂（部件号125201）：一瓶10mL MTT试剂。

2.洗涤剂溶液（部件号125202）：一瓶100毫升洗涤剂溶液

艾美捷MTT细胞增殖检测试剂盒测定方案：

1.制备含有0.1-1.0 x 106的细胞悬液培养基中的细胞/ml。

2.将每孔100μL加入96孔细胞培养板或每孔500μL加入24孔细胞培养物中有或没有待测化合物的板。细胞在37°C和5%培养24-96小时加湿培养箱中的二氧化碳。

3.加入10μlCytoSelect™ MTT细胞增殖测定试剂，如果使用96-孔板，或24孔板的每个孔50µL。

4.在37°C和5%CO2下孵育平板3-4小时，直至可见紫色沉淀（细胞在光学显微镜下可以更精确地观察到沉淀物）

5.在96孔板的每孔中加入100μL去污剂溶液，或在24孔板的每孔中加入500μL去污剂溶液盘子。

6.在室温下孵育2小时至避光过夜。

注意：在井中与洗涤剂溶液长时间孵育可能导致沉淀或浑浊可以增加背景。如果观察到沉淀，将板在37℃加热10-20分钟并搅拌溶解沉淀物。

7.使用540-570nm作为主波长读取吸光度。

相关文献：

1. Jacobsen MD, Weil M, Raff MC. (1996) J Cell Biol 133, 1041.

2. Papadopoulos NG, Dedoussis GV, Spanakos G, Gritzapis AD, Baxevanis CN, Papamichail M.

(1994) J Immunol Methods 177, 101.

3. Yamaori S, Ishii H, Chiba K, Yamamoto I, Watanabe K (2013) Toxicology 314, 251

4. Wang Y, Qu L, Gong L, Sun L, Gong R, Si J (2013) Cancer Biother Radiopharm. 28, 623

来源：https://www.amyjet.com/products/CBA-252.shtml