您的位置:首页 > 产品展厅 > 化工原料 > 化学试剂 > 生化试剂 > 艾美捷细胞低密度脂肪酸(LDL)摄取试剂盒的功能&应用
LDL是血液中胆固醇的主要载体,占血浆总胆固醇的60%以上。LDL通过apoB-100-LDL受体相互作用引发的受体介导的内吞作用被肝组织和肝外组织吸收。内化的LDL颗粒被运送到溶酶体,在溶酶体中降解为游离胆固醇和氨基酸。在人类中,肝脏是LDL分解代谢和LDL受体活性重要的器官。在肝脏中,LDL可以通过药物干预来调节。
细胞低密度脂肪酸(LDL)摄取试剂盒为研究细胞水平的LDL摄取和调节提供了方便的工具。该试剂盒使用与DyLight结合的人LDL™ 550(Thermo Fisher Scientific Inc.的产品)作为荧光探针,用于检测培养细胞对LDL的摄取。LDL受体特异性多克隆抗体和DyLight™ 488缀合的二抗体用于鉴定LDL受体的分布。
艾美捷细胞低密度脂肪酸(LDL)摄取试剂盒为研究细胞水平的LDL摄取和调节提供了便利的工具。该试剂盒采用人类低密度脂蛋白结合到DyLight™ 550作为荧光探针,用于检测培养细胞中LDL的摄取。LDL受体特异性多克隆抗体和DyLight™ 包括488个偶联的二抗,用于鉴定LDL受体的分布。
艾美捷细胞低密度脂肪酸(LDL)摄取试剂盒试剂准备:
1.LDL-DyLightTM 550工作溶液
稀释LDL DyLight™ 550(项目编号10011229)1:100,在适当的无血清培养基中。在加入细胞之,用0.45µm过滤器去除颗粒。
2.TBS-Triton缓冲液
通过将Triton X-100添加到TBS中制备TBS Triton缓冲液
浓度为0.1%。
3.兔抗LDL受体一抗体
在TBS Triton缓冲液中稀释兔抗LDL受体一抗体(项目编号10012422)1:100。
4.DyLightTM 488偶联山羊抗兔IgG二抗体
稀释DyLight™ 488缀合的山羊抗兔IgG二抗体(项目号10011231),1:100,TBS Triton缓冲液。
细胞处理和LDL DyLightTM 550的摄取:
以下方案适用于96孔板。对于其他尺寸的板,应相应调整每个孔的介质/溶液体积。我们建议每种治疗重复或三次。
1.用3 x 104个细胞/孔接种96孔板,并培养细胞过夜。对于HepG2细胞,在治疗使细胞生长两天。
2.第二天或第三天,用实验化合物或载体处理细胞24小时,或在典型实验方案中使用的时间段。
3.治疗期结束时,用75-100µl/孔LDL DyLight替换培养基™ 550在无血清培养基中制备的工作溶液。将细胞在37°C下再培养3-24小时,或在典型实验方案中使用的时间。
4.在LDL摄取培养结束时,抽吸培养基并用新鲜培养基或PBS代替。在显微镜下用能够分别测量激发波长540和发射波长570nm的滤光器检查LDL摄取的程度。细胞现在准备好使用第8页所述的程序对LDL受体进行免疫荧光染色。
艾美捷细胞低密度脂肪酸(LDL)摄取试剂盒性能特性:
图:Huh7人肝细胞LDL摄取。将Huh7细胞以1 x 104个细胞/孔接种在96孔板中,并使其附着和生长24小时。将LDL DylightTM 550以1:100的稀释度加入无血清培养基中并孵育过夜。通过将Hoechst 33342(项目编号15547)直接添加到培养基中至终浓度为5µM并在37°C下孵育30分钟,对细胞核进行染色。LDLR染色如试剂盒手册所述完成。使用配备Roper Scientific相机和MetaMorph软件的尼康Eclipse显微镜拍摄荧光图像(200X),并合并到ImageJ中。图A:绿色LDLR染色,图B:红色LDL摄取,图C:蓝色Hoechst,图D:合并图像。
来源:https://www.amyjet.com/products/10011125-1.shtml
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