艾美捷细胞失巢凋亡检测试剂盒测定原理&化验方案

癌症发展和生长的一个共同特征是转化细胞的生存能力在“非锚固”或“球状”生长条件下。这种对失巢症的抵抗显示与细胞稳态丧失、癌症生长和转移有关。抑制ECM上的细胞粘附、扩散和生长是细胞愈合过程的障碍，因此使其成为可能的治疗靶点。防止失巢，增强细胞粘附和扩散是细胞移植技术发展的一个主要目标，包括祖细胞。旨在控制失巢抗凋亡分子机制的进一步研究将有助于确定治疗许多人类恶性肿瘤的有效疗法。

细胞失巢凋亡检测试剂盒提供比色和荧光格式测量锚定非依赖性生长并监测失巢细胞死亡。该套件包含足够的试剂用于在Poly-Hema涂层的24孔板中测定24个样品。活细胞是用MTT或Calcein AM检测。用埃塞俄比亚同二聚体（EthD-1）检测细胞死亡。

艾美捷细胞失巢凋亡检测试剂盒测定原理：

细胞在聚Hema涂层板或对照板中培养。通过MTT或钙素AM。通过Ethidium Homodimer（EthD-1）测量失巢细胞死亡。EthD-1是一种用于测量死细胞的优良标记。EthD-1是一种红色荧光染料，只能穿透受损的细胞膜。EthD-1在结合ssDNA时将以40倍的增强发出荧光，dsDNA、RNA、寡核苷酸和三链DNA。背景荧光水平非常低因为染料在与细胞相互作用之实际上是非荧光的。

艾美捷细胞失巢凋亡检测试剂盒化验方案：

1.制备含有0.1-2.0 x 106的细胞悬浮液细胞/ml。细胞可以被处理具有失巢增强或抑制试剂。

2.将0.5mL细胞悬浮液添加到抗锚定板的每个孔或对照24孔细胞中培养板。在37ºC和5%CO2下培养细胞24-72小时。时间和培养条件将取决于所使用的细胞系，并且可能需要由用户调整。

3.进行MTT比色法或Calcein AM/EthD-1荧光法检测。

艾美捷细胞失巢凋亡检测试剂盒MTT比色检测：

1.将50µL MTT试剂添加到抗锚定板或对照24的每个孔中-井板。

2.在37ºC下孵育孔2-4小时或过夜。偶尔用倒置的显微镜检查是否存在紫色沉淀。

3.向每个孔中加入500µL洗涤剂溶液。用移液管轻轻混合溶液。

4.盖上盘子，使其避光，并在室温下在黑暗中孵育2-4小时。

5.将200µL转移到96孔板中，并在微量滴定板读取器。

下图显示了CytoSelect的典型结果细胞失巢凋亡检测试剂盒。以下数据仅供参考。该数据不应用于解释实际后果。

图：人胸成纤维细胞BJ-TERT细胞的失活测定。BJ-TERT细胞以50000个细胞/孔接种在组织培养对照板或Poly-Hema涂层板中。细胞是允许培养24小时。通过MTT和Calcein AM测定细胞活力用EthD-1染色失巢样细胞死亡。

细胞失巢凋亡检测试剂盒文献引用：

1. Bates RC, Buret A, van Helden DF, Horton MA, Burns GF. (1994) J Cell Biol 125, 403-415.

2. Frisch SM, Francis H. (1994) J Cell Biol 124, 619-626.

3. Frisch SM, Screaton RA. (2001) Curr Opin Cell Biol 13, 555-562.

4. Meredith JE, Jr Fazeli B, Schwartz MA. (1993) Mol Biol Cell 4, 953-961.

5. Rak J, Mitsuhashi Y, Erdos V, Huang SN, Filmus J, Kerbel RS. (1995) J Cell Biol 131, 1587-1598.

来源：https://www.amyjet.com/products/CBA-080.shtml