Kamiya丨Kamiya艾美捷人乳铁蛋白ELISA说明书

人乳铁蛋白ELISA是一种高度灵敏的双位点酶联免疫测定（ELISA）人类生物样品中乳铁蛋白的测定。仅供研究使用。不用于诊断程序。

引言

乳铁蛋白（LF）是一种具有抗菌活性的多功能铁结合蛋白。它存在于牛奶和其他粘膜中分泌物。众所周知，乳铁蛋白是抵抗感染和炎症的先天防御的一部分，也具有功能调节铁吸收。

Kamiya艾美捷人乳铁蛋白ELISA原理：

在该测定中，乳铁蛋白存在于样品与吸附在聚苯乙烯微量滴定仪表面的抗乳铁蛋白抗体反应

井。通过洗涤去除未结合的蛋白质后，与辣根结合的抗乳铁蛋白抗体过氧化物酶（HRP）。这些酶标记的抗体与先结合的乳铁蛋白形成复合物。在另一个洗涤步骤之后，通过添加显色剂来测定与免疫吸附剂结合的酶底物，3,3＇，5,5＇-TMB。结合酶的数量直接随测试样品中的乳铁蛋白；因此，在450nm处的吸光度是乳铁蛋白浓度的量度测试样品。测试样品中乳铁蛋白的量可根据以下公式构建的校准曲线进行插值：并对样品稀释进行校正。

Kamiya艾美捷人乳铁蛋白ELISA试剂准备：

1.浓缩稀释剂

提供的稀释剂溶液为5倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水稀释1:5。

2.浓缩洗涤液

提供的洗涤液为20X浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水稀释1:20。结晶当储存温度较低时，精矿中的形成并不罕见。将精矿加热至稀释30-35°C可溶解晶体。

3.酶抗体结合物浓缩物

通过添加10µL计算每个微量滴定板测试条所需的工作共轭溶液量酶抗体缀合物与990µL 1X稀释剂，用于每个测试条。立即稀释在使用，并防止光线照射。混合均匀，但要轻柔。避免起泡。

4.TMB基板溶液

随附随用。

5.停止解决方案

随附随用。

6.微量滴定板

随附随用。打开微量滴定袋并从袋中取出板。移除所有将不得用于分析，将其放回袋中，并与干燥剂一起重新密封。

7.人乳铁蛋白校准仪

将1.0mL蒸馏水或去离子水加入冻干人乳铁蛋白校准仪中，并轻轻混合直至溶解。校准器现在的浓度为18.40µg/mL（重新配制的校准器应为如果打算将来使用，立即等分并冷冻）。需要准备人乳铁蛋白校准品使用立即（见下表）。在每一步之间充分混合。避免起泡。

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来源：https://www.amyjet.com/brand/Kamiya.shtml