Kamiya丨Kamiya艾美捷人α1-抗糜蛋白酶ELISA说明书

人α1-抗糜蛋白酶（CYT）ELISA是一种高度灵敏的双位点酶联免疫测定法（ELISA）用于定量测定人类生物样品中的α1-抗糜蛋白酶。仅供研究使用。不用于诊断程序。

Kamiya艾美捷α1-抗糜蛋白酶（CYT）ELISA原理：

在该试验中，样品中存在的α1-抗胰凝乳蛋白酶与已吸附至聚苯乙烯微量滴定孔的表面。通过洗涤去除未结合的蛋白质后加入与辣根过氧化物酶（HRP）缀合的酶。这些酶标记的抗体与先结合的CYT。在另一洗涤步骤之后，通过添加显色底物3,3＇，5,5＇-TMB。结合酶的数量直接变化测试样品中的CYT浓度；因此，在450nm处的吸光度是测试样品中的CYT。测试样品中的CYT量可根据构建的校准曲线进行插值并对样品稀释进行校正。

需要但未提供的材料：

•用于配制和分配稀释液的精密移液管（2µL至200µL）

•试管

•喷壶或微孔板清洗机/吸气器

•蒸馏或去离子水

•微孔板读取器

•用于制备试剂和缓冲溶液的各种玻璃器皿

•计时器

•用于样本采集的离心机

•血浆采集抗凝剂

组件：

1.浓缩稀释剂

一瓶含有50mL 5X浓缩稀释液流动缓冲液。

2.浓缩洗涤液

一瓶含有50mL 20X浓缩洗涤液。

3.酶抗体结合物浓缩物

一个含有150µL 100X浓缩亲和纯化的抗人α1-抗糜蛋白酶抗体的小瓶

在稳定缓冲液中与HRP偶联。

4.TMB基板溶液

一瓶含有12mL TMB和过氧化氢的柠檬酸缓冲液（pH 3.3）。

5.停止解决方案

一瓶含12 mL 0.3 M硫酸。

警告：避免接触皮肤。

6.微量滴定板

12个可拆卸的8个井条，位于井支架框架内。孔用亲和纯化的抗人CYT包被。

7.人α1-抗糜蛋白酶校准器

一个装有冻干人α1-抗胰蛋白酶校准品的小瓶。

标本采集和处理：

应通过静脉穿刺收集血液，并在凝块形成后通过离心将血清与细胞分离。对于血浆样本，应将血液收集到装有抗凝剂的容器中，然后离心。应注意为了尽量减少溶血，过量的溶血会影响您的结果。立即测定或等分并储存-20°C下的样品。避免反复冷冻/解冻。对于任何可能含有病原体的样本，必须小心防止与开放性伤口接触。

Kamiya艾美捷人α1-抗糜蛋白酶（CYT）ELISA样品的稀释：

样品中CYT的定量测定要求在使用对每个测试样品进行稀释。1:5000稀释适用于大多数血清/血浆样品。对于产生超出范围结果的样本的绝丨对定量对于校准曲线，可能需要更小或更大的稀释度。如果不确定样品水平，使用强烈建议在运行整个板之使用一个或两个代表性样品。

为制备1:5000稀释的样品，将5µL样品转移至495µL 1X稀释剂中。这样可以得到1:100的稀释度。接下来，通过将10µL 1X稀释剂转移至490µL稀释1:100样品。你现在有1:5000的稀释度样品在每个阶段充分混合。

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来源：https://www.amyjet.com/brand/Kamiya.shtml